Scongelamento degli embrioni di coniglio: una procedura di riscaldamento per recuperare embrioni di coniglio crioconservati per il trasferimento degli embrioni

Abstract

Fonte: Garcia-Dominguez, X. et al., Trasferimento di embrioni minimamente invasivo e vitrificazione di embrioni allo stadio embrionale ottimale nel modello di coniglio. J. Vis. Exp. (2019)

Questo video mostra la procedura per lo scongelamento degli embrioni di coniglio vitrificati e i passaggi di misurazione precauzionale per un recupero ottimale degli embrioni.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Riscaldamento dell'embrione

1. Scongelare gli embrioni in un unico passaggio.
   1. Posizionare il ministro, orizzontalmente a 10 cm dal vapore di azoto liquido, per 20-30 s.
   2. Quando inizia il processo di cristallizzazione all'interno del ministro, immergere il ministra in un bagno d'acqua a 25°C per 10-15 s.
   3. Rimuovere il tappo di manutenzione e tagliare il tappo di cotone.
   4. Con un microdosatore accoppiato, espellere tutto il contenuto di somministrare in una piastra contenente una soluzione di saccarosio 0,33 M a 25°C in BM per 5 minuti.
      nota: Questo passaggio deve essere eseguito rapidamente per ridurre l'esposizione dell'embrione alla soluzione di vitrificazione.
   5. Spostare gli embrioni in una nuova piastra contenente la soluzione BM per altri 5 minuti.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
azoto liquido	Aria Liquida	P1505XXX
Piastre di Petri, 35 mm	Sigma Aldrich	CLS430165-500EA
Medicazione in plastica (Nobecutan)	IBOR medica	7140028
Cannuccia di plastica 0,25 mL	IMV - tecnologie	Codice 6431
forbici	ROBOZ	RS-5880	Qualsiasi normale forbice dritta in acciaio di grado chirurgico funzionerà bene.
Guanti sterili	Alvet Escartí	Codice 087GL010075
Camice sterile	Alvet Escartí	12261501
Mascherina sterile	Alvet Escartí	Codice 058B15924B
Tappo di paglia	IMV - tecnologie	Codice 6431
saccarosio	Sigma Aldrich	S7903
Bagno d'acqua	RAYPA	BAE-4
Soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco (DPBS)	Sigma Aldrich	D5773	Senza cloruro di calcio.