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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Induzione dell'espressione genica o shRNA tetraciclina-dipendente
ATTENZIONE: La doxiciclina può essere dannosa. Si prega di fare riferimento alla scheda di dati di sicurezza.
NOTA: A seconda del tipo e della durata dell'esperimento, la doxiciclina può essere fornita nell'acqua potabile.
- Per esperimenti a breve termine (<10 giorni) somministrare doxiciclina attraverso l'acqua potabile utilizzando il seguente protocollo.
- Sciogliere 5 g di saccarosio in 100 ml di acqua di rubinetto. Autoclave.
- Sciogliere 100 mg di doxiciclina-iclilato in 5 mL di soluzione di saccarosio (fase 1.1.1) in una provetta conica da 15 mL.
- Utilizzando una siringa da 10 ml, filtrare in modo sterile la soluzione attraverso un filtro da 0,2 μm. Aggiungere alla soluzione di saccarosio preparata al punto 1.1.1.
- Fornire al topo una soluzione di doxiciclina-saccarosio come acqua potabile. Controllare quotidianamente e sostituire quando la soluzione diventa torbida, indicando una proliferazione batterica eccessiva (sostituire la soluzione limpida al più tardi dopo tre giorni).