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Trasformazione genica basata su vettori cromosomici artificiali batterici binari nelle piante di Arabidopsis: una tecnica per generare piante transgeniche con inserimento a copia singola

July 8th, 2025

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Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Tark-Dame, M., et al. Generazione di piante transgeniche con inserimenti a copia singola utilizzando il vettore binario BIBAC-GW. J. Vis. Exp. (2018).

In questo video, dimostriamo la generazione di piante transgeniche di Arabidopsis che esprimono un transgene stabile attraverso la trasformazione genica basata su cromosomi artificiali batterici binari mediata da Agrobacterium.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Arabidopsis Trasformazione

  1. Preparare le piante di Arabidopsis per la trasformazione.
    1. Coltiva le piante di Arabidopsis in una serra o in una camera di crescita climatizzata fino alla fioritura (12 vasi con 9 piante ciascuno per immersione).
    2. Aggancia i primi bulloni per consentire l'emergere di più bulloni secondari. Le piante sono pronte per l'immersione 4–6 giorni dopo la tosatura, quando le piante hanno molti capolini immaturi e non molte silique fecondate.
  2. Immersione floreale
    1. Immergere le infiorescenze per 5-10 secondi in sospensione di Agrobact....

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Figura 1: Vassoio riempito con piantine di Arabidopsis prima e dopo il trattamento con glufosinato-ammonio. Le piantine che non esprimono il gene bar presente nel t-DNA pBIBAC-BAR-GW muoiono dopo essere state spruzzate con una soluzione di glufosinato-ammonio. Le foto mostrano lo stesso vassoio di piantine (A) prima dell'irrorazione con glufosinato-ammonio, 14 giorni dopo la semina, e (B) 10.......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Kanamicina solfato monoidratoDuchefaK0126
Miscela di enzimi clonasi Gateway LR Thermo Scientific - InvitrogenCodice 11791-019
Murashige Skoog medioDuchefaCodice: M0221
agarBdCodice 214010
Glufosinato-ammonio (Basta)Bayer79391781
Imager al fosforoGE Healthcare Scienze della vitaTifone FLA 7000
pellicola trasparente (Saran wrap)Omnilabo1090681
agarosioThermo Scientific - InvitrogenOre 16500

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Tags

Binary Bacterial Artificial ChromosomeAgrobacterium mediated TransformationArabidopsis PlantsSingle copy InsertionFloral Dipping TechniqueFluorescence MicroscopyHerbicide Resistance ScreeningGenomic DNA ExtractionPCR AnalysisSeed specific Promoter

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