Trasformazione genetica mediata da Agrobacterium: un metodo per trasformare geneticamente il genoma del riso tramite Agrobacterium tumefaciens geneticamente modificato

Abstract

Fonte: Xu, D., et al. Trasformazione genetica mediata da agrobatterio, produzione transgenica e sua applicazione per lo studio dello sviluppo riproduttivo maschile nel riso. J. Vis. Exp. (2020).

In questo video, dimostriamo la trasformazione genetica del genoma del riso utilizzando un vettore binario di Agrobacterium tumefaciens. Questo batterio facilita il trasferimento di un plasmide di DNA estraneo utilizzando le proteine di virulenza dell'Agrobacterium.

Protocollo

1. Trasformazione genetica del riso e coltura di tessuti vegetali

1. Induzione e rigenerazione del callo
   nota: Utilizzare infiorescenze di riso giovani fresche come materiale di partenza per indurre il callo (Figura 1).
   1. Raccogli le giovani infiorescenze dalla risaia o dalla serra nella fase di meiosi, determinata dalla lunghezza del fiore di 1,6-4,8 mm (Figura 1A). Assicurati che le infiorescenze di riso siano coperte con una guaina fogliare. Pulisci ogni infiorescenza con un batuffolo di alcol al 70% e lascialo asciugare prima di tagliare.
   2. Porta l'infiorescenza su un banco steri....

Risultati

Figura 1: Materiali di partenza per indurre il callo. (A) Giovani infiorescenze di riso allo stadio di meiosi. (B) Giovani infiorescenze sezionate che crescono sul terreno NBD2. Barra = 2 cm in (A).

Figura 2: Procedura per la produzione di linee transg.......