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1. Il metodo della capsula per l'inattivazione in biocontenimento con glutaraldeide al 2%, seguita da colorazione negativa in un laboratorio BSL-2
- Procedura di inattivazione del virus.
- All'interno del BSC di biocontenimento, miscelare bene la sospensione virale con lo stesso volume di glutaraldeide al 4% per ottenere una concentrazione finale del 2% di glutaraldeide.
cautela: La glutaraldeide è una sostanza chimica pericolosa e richiede una protezione adeguata. La glutaraldeide può essere utilizzata per brevi periodi in una normale BSC, ma un reagente aperto prolungato richiede il lavoro in una BSC canalizzata o in una cappa chimica.
- Inattivare i virus con fissativo per un minimo di 24 ore prima del confezionamento, della decontaminazione e trasferirli alla struttura BSL-2 EM.
- Nella struttura BSL-2 EM, aspirare il virus e la miscela fissativa nella capsula, contenente due griglie TEM, attaccate a una pipetta.
- Posizionare la pipetta orizzontalmente per 10 minuti con le griglie orientate orizzontalmente.
nota: Questo per promuovere una distribuzione uniforme delle particelle virali sulle griglie TEM.
- Prendere la pipetta e premere lo stantuffo per espellere il virus in un contenitore per rifiuti. Aspirare 40 μL di acqua dI nelle capsule ed espellerla nel contenitore dei rifiuti per 3 cicli di risciacquo.
- Aspirare 40 μL di acetato di uranile all'1% (UA) o acido fosfotungstico di potassio (PTA) all'1% nelle capsule per 30 s.
nota: Il tempo di colorazione variava da 10 s a 1 min in base al campione di virus.
cautela: L'UA è un emettitore alfa e una tossina cumulativa. Maneggiarlo con una protezione adeguata.
- Rimuovere la capsula dalla pipetta e asciugare le griglie toccando il bordo delle griglie con un pezzo di carta da filtro. Asciugare le griglie all'aria e conservarle per il successivo imaging TEM.