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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Colorazione blu toluidina
- Preparare una soluzione all'1% di blu di toluidina sciogliendo 2 g di borato di sodio in 100 ml di acqua deionizzata, quindi aggiungere 1 g di blu di toluidina e mescolare fino a quando non si sarà sciolto. Filtrare la soluzione con carta da filtro (dimensione dei pori: 11 μm) e conservare la soluzione in un flacone opaco a temperatura ambiente per un massimo di due settimane.
- Utilizzando una pipetta di plastica o un micro pipettatore, aggiungere una goccia di soluzione di blu di toluidina sulla parte superiore delle sezioni nervose e lasciare agire per 20-30 s.
- Sciacquare via tutto l'eccesso di soluzione blu di toluidina immergendo delicatamente i vetrini in un barattolo di acqua deionizzata e ripetere 3-4 volte fino a quando le sezioni non sono chiare. Asciugare i vetrini per almeno 15 minuti a 60 °C o durante la notte a temperatura ambiente e quindi coprire le sezioni con un vetrino coprioggetti utilizzando un normale mezzo di montaggio. Esaminare immediatamente i vetrini montati o conservarli a temperatura ambiente.
- Esaminare al microscopio ottico. Si consiglia una lente a immersione in olio 100X per le immagini dettagliate utilizzate per calcolare i rapporti g.