Colorazione di Papanicolaou: una tecnica per visualizzare le caratteristiche citologiche delle cellule tubariche

Abstract

Fonte: Chen, H. et al. Citologia tubarica delle tube di Falloppio come strumento promettente per la diagnosi precoce del cancro ovarico. J. Vis. Exp. (2017).

In questo video, dimostriamo un protocollo modificato di colorazione di Papanicolaou per studiare la citologia tubarica. Questa tecnica può essere utilizzata per visualizzare le caratteristiche citologiche delle cellule epiteliali maligne e non maligne delle tube di Falloppio.

Protocollo

1. Protocollo di colorazione Papanicolaou modificato

1. Colorare i vetrini spalmati di tessuto eseguendo la procedura automatizzata di colorazione non ginecologica, come illustrato nella Tabella 1.
   NOTA: Il metodo di colorazione rappresenta una modifica della tecnica di colorazione Papanicolaou che utilizziamo abitualmente per i campioni non ginecologici. Utilizziamo un processatore di tessuti automatizzato per colorare alcuni vetrini. In questo studio abbiamo scelto la procedura di colorazione non ginecologica rispetto alla procedura di colorazione ginecologica. L'Eosina utilizzata è l'EA-65, al posto dell'EA-50 utilizzato per i campioni ginecologici (campione di Pap test). Inoltre, l'OG-6 nella procedura di colorazione Gyn, che è principalmente per la colorazione delle cellule squamose, non è incluso nella procedura di colorazione poiché non si prevede che in questo studio si vedano cellule squamose. EA65 (Eosin Azure) è una soluzione di controcolorazione composta da 3 coloranti: Eosina Y, Fast green FCF e Bismarck brown Y. La procedura è illustrata nella Tabella 1.
2. Eseguire una procedura manuale rapida di colorazione Pap come segue:
   1. Immergere il vetrino spalmato di tessuto in etanolo al 95%, 10 volte, con ogni immersione che dura circa 1 s.
   2. Immergere il vetrino in H₂O, 10 volte, con ogni immersione che dura circa 1 s.
   3. Emergere il vetrino in ematossilina per 10 - 60 s.
   4. Immergere il vetrino in H₂O, 10 volte, con ogni immersione che dura circa 1 s.
   5. Immergere il vetrino in etanolo al 95%, 10 volte, con ogni immersione che dura circa 1 s.
   6. Emergere il vetrino in EA65 per 1 - 3 min.
   7. Immergere il vetrino in H₂O, 10 volte, con ogni immersione che dura circa 1 s.
   8. Immergere il vetrino in etanolo al 95%, 10 volte, con ogni immersione che dura circa 1 s.
   9. Immergere il vetrino nello xilene fino a quando il vetrino non diventa chiaro.
      NOTA: Questa è una procedura di colorazione Papanicolaou modificata. Questo metodo viene utilizzato come metodo di colorazione più rapido per i casi con tempo o spazio limitati, come l'aspirazione con ago sottile in loco e i campioni STAT. Questa procedura fornisce una colorazione di qualità paragonabile a quella della procedura automatizzata di colorazione non ginecologica. La procedura è illustrata nella Tabella 2.

Tabella 1: Passaggi per macchie non ginecologiche.

95% Etanolo	5 minuti
H2O	10 secondi
ematossilina	15 sec - 3 min
H2O distillato	5 minuti
95% Etanolo	30 secondi
EA65	2 - 5 minuti
95% Etanolo	30 secondi
95% Etanolo	30 secondi
100% etanolo	30 secondi
100% etanolo	30 secondi
xilene	30 secondi
xilene	5 minuti

Tabella 2: Passaggi rapidi manuali per la colorazione del pappa.

95% Etanolo	10 tuffi
H2O	10 tuffi
ematossilina	10 sec-1 min
H2O distillato	10 tuffi
95% Etanolo	10 tuffi
EA65	1 - 3 minuti
95% Etanolo	10 tuffi
100% etanolo	10 tuffi
xilene	Immergere fino a quando non diventa chiaro

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Macchia di Papanicolaou, EA 65	Sigma Aldrich	HT40432
95% Etanolo	Sigma Aldrich	652261
100% etanolo	Sigma Aldrich	493538
xilene	Sigma Aldrich	214736
ematossilina	Sigma Aldrich	H9627