Colorazione tricromica Masson Goldner: una tecnica per visualizzare il collagene nelle sezioni cardiache per il rilevamento della fibrosi cardiovascolare

Abstract

Fonte: Valentin, J., et al. Quantificazione istologica dell'infarto miocardico cronico nei ratti. J. Vis. Exp.(2016).

Questo video dimostra la colorazione differenziale di fibre di collagene, nuclei e citoplasma nel tessuto cardiaco per visualizzare la crescita fibrotica associata a patologie cardiache.

Protocollo

1. Colorazione tricromica di Masson-Goldner

1. Realizzare sezioni di tessuto da blocchi cardiaci inclusi in paraffina con un microtomo manuale (spessore: 5 μm).
2. Colorare un vetrino da ogni parte del cuore per ogni ratto (3 - 4 sezioni trasversali per vetrino) con colorazione tricromica di Masson-Goldner.
   1. Sciogliere i vetrini a 60 °C in forno. Sotto una cappa aspirante, deparaffinarli in xilolo due volte per 10 minuti ciascuno. Reidratarli in etanolo al 100%, etanolo al 95%, etanolo al 70% e acqua distillata per 3 minuti ciascuno.
   2. Fissali nella soluzione di Bouin durante la notte. Quindi, sciacquarli in acqua corrente per 10 - 15 minuti. Sciacquateli in acqua distillata. Incubarli nell'ematossilina di Mayer per 3 minuti.
   3. Togliete i vetrini e lasciateli in acqua distillata per 5 minuti. Quindi, incubarli nell'acido Fuchsin-Ponceau per 5 minuti. Sciacquarli in acido acetico all'1% per 1 minuto.
   4. Quindi, incubarli in acido fosfomolibdico Orange G per 1 minuto. Sciacquarli in acido acetico all'1% per 1 minuto, incubarli in colorante verde chiaro per 10 minuti e sciacquarli in acido acetico all'1% per 1 minuto.
   5. Disidratarli in etanolo al 70% (30 sec), etanolo al 95% (30 sec) ed etanolo al 100% (5 min). Metti una goccia di un mezzo di montaggio resinoso sulle sezioni di tessuto, coprile con vetrini coprioggetti e lasciale asciugare.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Ematossilina di Mayer	MHS32-1L	Sigma Aldrich
Acido Fuchsin CI 42685	F8129-50G	Sigma Aldrich
Ponceau Xylidin CI 16150	P2395-25G	Sigma Aldrich
Arancione G CI 16230	O3756-100G	Sigma Aldrich
Verde chiaro CI 42095	L5382-25G	Sigma Aldrich
xilolo	10315083	Honeywell
Etanolo assoluto	10303990	Honeywell
Microscopio sterelogico	SM2800	Nikon
Formaldeide	Codice 99340	Reactolab
Cassetta di inclusione	K113.1	Carl Roth
Software di misurazione delle immagini Bersoft		Bersoft.com	Software concesso in licenza