Colorazione con rosso Congo: una tecnica per visualizzare i depositi di cellulosa nelle sezioni del fusto delle piante

Abstract

Fonte: Pradhan Mitra, P., Loqué, D. Colorazione istochimica degli elementi della parete cellulare secondaria di Arabidopsis thaliana. J. Vis. Exp. (2014).

In questo video, dimostriamo il metodo di colorazione del rosso Congo per visualizzare i depositi di cellulosa nelle sezioni dello stelo di Arabidopsis thaliana.

Protocollo

1. Colorazione Rosso Congo

1. Sciogliere 0,5 g di rosso congo in 100 ml di acqua distillata per preparare una soluzione di rosso congo allo 0,5%.
2. Trasferire le sezioni dello stelo in una provetta da microcentrifuga da 2,0 ml. Aggiungere 1 ml della soluzione di rosso congo allo 0,5% nella provetta. Pipettare delicatamente la soluzione di rosso congo allo 0,5% su e giù senza disturbare le sezioni.
   NOTA: Fare attenzione a non pipettare le sezioni nel puntale della pipetta in quanto ciò potrebbe danneggiare le sezioni.
3. Incubare a temperatura ambiente per 10 minuti e ripetere il pipettaggio. Seguire con altri 3 minuti di incubazione a temperatura ambiente.
4. Utilizzare una pipetta da 1 ml per estrarre 700 μl di soluzione di rosso congo allo 0,5%. Aggiungere 700 μl di acqua distillata per sciacquare la soluzione di rosso congo. Ripetere il lavaggio 3-4 volte fino a quando la soluzione di lavaggio non è limpida.
5. Utilizzare una pipetta da 1 ml con la punta tagliata in modo tale che le sezioni possano essere pipettate facilmente senza danni. Pipettare delicatamente le sezioni nel puntale e su un vetrino da microscopio e coprirle con un vetrino coprioggetti. Osservare i campioni sul vetrino del microscopio sotto eccitazione della luce blu utilizzando un filtro con una banda passante di 560/40.
   NOTA: Non conservare le sezioni in acqua per molto tempo prima dell'analisi microscopica, poiché l'acqua laverà via il rosso congo in 10-30 minuti.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Rosso Congo	sigma	Codice: C6277	Disodio 3,3'-[[1,1'-bifenil]-4,4'-diilbis(azo)]bis(4-amminonaftalene 1-solfonato) [Numero CAS 573-58-0]
Provette per microcentrifuga (0,6 ml)	Axygen Scientific	MCT-060-C
Fotocamera con chip CCD senza otturatore meccanico	Hamamatsu	Codice: C4742-95
Telecamera a colori ad alta velocità	QImaging	MicroPublisher 5.0 RTV
Software della fotocamera	Dispositivi molecolari	MetaMorph versione 7.7.0.0
Immaginare l'analisi	adobe	Photoshop CS4
Occhiali Micro Cover, quadrati, n. 1	VWR	Codice 48366-067	I vetri di copertura 22 x 22 mm (7/8 x 7/8") sono resistenti alla corrosione e uniformemente spessi e piatti. Lo spessore n. 1 è compreso tra 0,13 e 0,17 mm.
Micro vetrini smerigliati, 1 mm	VWR	Codice 48312-003	75 x 25 mm - 1 mm
TX2 Cubo filtrante	Leica	11513851/11513885	Filtro utilizzato per l'analisi del rosso Congo con una banda passante di 560/40.