Colorazione bianca Calcofluor: un metodo semplice per la visualizzazione della fluorescenza indotta dai raggi UV dei depositi di cellulosa nelle pareti cellulari delle sezioni del fusto della pianta Dicot

In questo articolo

Abstract

Fonte: Pradhan M. et al. Colorazione istochimica degli elementi della parete cellulare secondaria di Arabidopsis thaliana. J. Vis. Exp. (2014)

In questo video, descriviamo una procedura di colorazione per visualizzare la deposizione di cellulosa all'interno delle pareti cellulari di Arabidopsis thaliana, una pianta ditiledone, utilizzando il bianco calcofluor, che si lega specificamente ai glucani legati alla β, esibendo fluorescenza sotto luce UV.

Protocollo

1. Incorporamento dello stelo

Preparare una soluzione di agarosio al 7% in acqua (7 g di agarosio per elettroforesi in 100 ml di acqua distillata). Sciogliere l'agarosio in autoclave per 20 minuti o nel microonde per 20 minuti alla minima intensità (ad esempio, 10% di intensità di un microonde da 1.250 watt).
Prepara uno stampo fatto in casa per incorporare gli steli usando fiale di plastica.
1. Utilizzando una lama di rasoio, tagliare il fondo conico di una provetta per microcentrifuga con tappo a vite da 2 ml (Parte A). Con un ago da siringa, praticare un foro nel tappo del tubo leggermente più grande del diam....

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Risultati

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Figura 1. Stampo fatto in casa per incorporare gli steli. Sul lato sinistro; la parte superiore della provetta per microcentrifuga con tappo a vite da 2 ml (Parte A) e la parte inferiore della provetta per microcentrifuga da 0,6 ml (Parte B). Sul lato destro; il Parafilm che trattiene le due parti; A e B per formare lo stampo finale.

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