Elettroforesi su gel di poliacrilammide: una tecnica analitica per rilevare solfati di eparan di varie lunghezze di catena isolati dal tessuto polmonare di topo

Abstract

Fonte: LaRiviere, W. B. et al., Rilevamento di glicosaminoglicani mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide e colorazione con argento. J. Vis. Exp. (2021)

Questo video mostra la procedura di separazione dei solfati di eparan isolati dal tessuto polmonare di topo utilizzando l'elettroforesi su gel di poliacrilammide.

Protocollo

1. Elettroforesi su gel di poliacrilammide di glicosaminoglicani isolati e purificati

1. Preparare in anticipo le soluzioni necessarie per l'elettroforesi su gel di poliacrilammide (PAGE) (Tabella 1).
   nota: Selezionare la percentuale di acrilammide della soluzione in gel risolutiva in base alle dimensioni dei glicosaminoglicani che si prevede siano nel campione. il 15% è raccomandato per la risoluzione di frammenti più grandi (di lunghezza superiore a 30 subunità disaccaridiche); 22% per frammenti più piccoli (<20 subunità disaccaridiche di lunghezza).
2. Posizionare la cassetta vuota nel serba....

Risultati

Tabella 1: Soluzioni necessarie per l'elettroforesi su gel di poliacrilammide di glicosaminoglicani purificati. Tutte le soluzioni devono essere filtrate (0,22 μm) prima dell'uso.

NOTA: Tutte le soluzioni devono essere filtrate (0.22μm) prima dell'uso.
soluzione	ricetta

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Persolfato di ammonio (solido)	ThermoFisher Scientifico	BP179-25	Grado di elettroforesi
Sistema di purificazione dell'acqua Barnstead GenPure Pro	ThermoFisher Scientifico	10-451-217PKG	Qualsiasi sistema di deionizzazione/purificazione dell'acqua è un sostituto accettabile
Acido borico (solido)	ThermoFisher Scientifico	A73-500	Grado di biologia molecolare
Blu bromfenolo (solido)	ThermoFisher Scientifico	B392-5
Criterio: cassetta vuota per PAGE (spessore 1,0 mm, 12+2 pozzetti)	Bio-Rad	3459901	Qualsiasi sistema di cassette di colata PAGE di 1,0 mm di spessore sarà sufficiente
Criterio PAGE Sistema di celle (cella e alimentatore)	Bio-Rad	1656019	Qualsiasi sistema PAGE verticale in gel comparabile funzionerà)
Sale disodico EDTA (solido)	ThermoFisher Scientifico	02-002-786	Grado di biologia molecolare
Glicina (solida)	ThermoFisher Scientifico	G48-500	Grado di elettroforesi
Acido cloridrico (liquido)	ThermoFisher Scientifico	A466-250
N,N'-metilene-bis-acrilammide (solido)	ThermoFisher Scientifico	BP171-25	Grado di elettroforesi
Rosso fenolo (solido)	ThermoFisher Scientifico	P74-10	Acido libero
Saccarosio (solido)	ThermoFisher Scientifico	BP220-1	Grado di biologia molecolare
TEMED (N,N,N',N'-tetrametilendiammina)	ThermoFisher Scientifico	BP150-20	Grado di elettroforesi
Base Tris (solida)	ThermoFisher Scientifico	BP152-500	Grado di biologia molecolare
Unità filtrante sottovuoto, monouso, PES poro 0,22uM, volume 500mL	ThermoFisher Scientifico	Codice: 569-0020	Volumi alternativi e materiali filtranti accettabili
Acrilammide (solido)	ThermoFisher Scientifico	BP170-100	Grado di elettroforesi
Decasaccharide derivato dall'eparina (dp10)	Galeno scientifico	HO10
Esasaccaharde derivato dall'eparina (dp6)	Galeno scientifico	HO06
Oligosaccaride derivato dall'eparina (dp20)	Galeno scientifico	HO20