Un Matrigel-Based Formazione Assay tubo per valutare l'attività vascolare delle cellule tumorali

Sommario

Un test formazione del tubo viene usato per valutare l'attività vascolare delle cellule tumorali.

Abstract

Nel corso degli ultimi decenni, un saggio di formazione del tubo utilizzando il fattore di crescita-è stato ridotto Matrigel tipicamente impiegato per dimostrare l'attività angiogenica delle cellule dell'endotelio vascolare in vitro ^1-5. Tuttavia, l'evidenza di recente crescita ha dimostrato che questo saggio non si limita a testare il comportamento per le cellule endoteliali vascolari. Invece, è stato anche utilizzato per testare la capacità di un certo numero di cellule tumorali di sviluppare un fenotipo vascolare ^6-8. Questa capacità è stata coerente con il loro comportamento vascolare identificato in animali xenotransplanted, un processo noto come mimetismo vascolare (VM) ^9. C'è una moltitudine di prove che dimostrano che cellule tumorali mediata VM svolge un ruolo fondamentale nello sviluppo del tumore, indipendentemente angiogenesi delle cellule endoteliali ^{6, 10-13.} Per esempio, le cellule tumorali sono stati trovati a partecipare al perfuso sangue, la formazione di canali vascolari in campioni di tessuto da pazienti affetti da melanoma e glioblastoma ^{8, 10, 11.} Qui, abbiamo descritto questa analisi tubolare rete come uno strumento utile nella valutazione dell'attività vascolare delle cellule tumorali. Abbiamo scoperto che alcune linee cellulari tumorali come il melanoma B16F1 cellule, le cellule di glioblastoma U87, e il cancro al seno MDA-MB-435 cellule sono in grado di formare tubuli vascolare, ma alcuni non lo fanno come il cancro del colon HCT116 cellule. Inoltre, questo fenotipo vascolare dipende dal numero di cellule placcato sul Matrigel. Pertanto, questo test può servire come potente utility per lo screening del potenziale vascolare di una varietà di tipi cellulari tra cui le cellule vascolari, le cellule tumorali oltre che altre cellule.

Protocollo

1. Un Matrigel-Based Formazione Assay tubo per valutare l'attività vascolare delle cellule tumorali

1. Preparazione delle cellule tumorali e cellule endoteliali: le cellule tumorali del cervello, come le cellule U87, B16F1 cellule di melanoma, cancro al seno MDA-MB-435, e le cellule del colon HCT116 sono state coltivate in DMEM supplementato con 10% FBS e la penicillina / streptomicina (tutti da Invitrogen ). Delle cellule endoteliali linea di cellule endoteliali microvascolari (HMVECs) sono state coltivate in EBM2 medio (Lonza) integrata con 1 mg / ml di idrocortisone e 1 ng / ml fattore di crescita epidermico, il 10% FBS e la penicillina / streptomicina. Le....

Discussione

Perché questo test per avere successo, la qualità del Matrigel deve essere testato prima. Un piccolo campione possono essere ottenute presso Bioscience BD per pre-eseguire il test utilizzando HMVECs. Prodotti lotti diversi possono visualizzare qualità dissimili in cui alcuni lotti non forniscono una condizione ottimale per la formazione del tubo. In secondo luogo, tutte le bolle dovrebbe essere evitato quando un'aliquota del Matrigel viene caricato in piastre a 96 pozzetti, perché le bolle possono interrompere la fo.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Nome del reagente	Azienda	Numero di catalogo
DMEM	Invitrogen	11995
FBS	Invitrogen	16000-044
Fattore di crescita ridotto Matrigel	BD Bioscience	47743-720
EBM2 kit	Lonza	CC-3156
Nikon ECLIPSE TS100 microscopio	Nikon