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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE
1. Valutazione del flusso sanguigno cerebrale con spettroscopia di correlazione diffusa
- Acquisizione dati DCS
- Rimuovere i peli sul cuoio capelluto. Poiché la MDD funziona meglio in assenza di peli, è necessario rimuovere il pelo sulla testa prima dell'inizio degli esperimenti. In genere, la depilazione viene eseguita 1-3 giorni prima dell'inizio dello studio.
- Indurre i topi con isoflurano al 4,5% in ossigeno al 100% per 45 secondi e mantenere con isoflurano all'1-2% in ossigeno al 100%.
- Radere la testa tra gli occhi e le orecchie. Quindi, utilizzare una crema depilatoria per rimuovere il pelo sulla testa come nella Figura 1.
- Lasciare che l'animale si riprenda dall'anestesia su un cuscinetto riscaldante e poi tornare nella gabbia.
- Misurare il flusso sanguigno cerebrale con MDD. Per ridurre al minimo gli artefatti da movimento durante la misurazione, studiare i topi in breve anestesia con isoflurano.
nota: Monitora visivamente la respirazione e la risposta al pizzicamento delle dita dei piedi durante le misurazioni e regola la concentrazione di isoflurano secondo necessità per garantire una profondità costante dell'anestesia. Variazioni significative nella profondità dell'anestesia potrebbero alterare il flusso sanguigno dati i noti effetti vasomodulatori dell'isoflurano.
- Indurre con isoflurano al 4,5% in ossigeno al 100% per 45 secondi, quindi mantenere con isoflurano all'1,0-1,75% in ossigeno al 100%. Confermare una profondità sufficiente dell'anestesia in base all'assenza di una risposta al pizzicamento delle dita dei piedi e alla respirazione normale (tra ~60-80 respiri al minuto).
- Dopo un periodo di stabilizzazione di 2 minuti, appoggiare delicatamente il sensore DCS sull'emisfero destro in modo che il bordo superiore del sensore ottico sia allineato con la parte posteriore dell'occhio e il lato del sensore si allinei lungo la linea mediana (Figura 1). Metti una mano a coppa sul sensore per proteggerlo dalla luce della stanza. Acquisizione di 5 secondi di dati (acquisizione a 1 Hz).
- Riposizionare il sensore sull'emisfero sinistro e acquisire 5 secondi di dati.
- Ripetere 3 volte/emisfero per tenere conto delle eterogeneità locali sotto la superficie del tessuto.
- guarigione
- Rimuovi il mouse dall'anestesia e posizionalo su un tappetino riscaldante.
- Dopo che il topo ha riacquistato il suo riflesso raddrizzatore, rimettilo nella gabbia.
