Method Article

Le uova di pollo finestre di Studi sullo sviluppo

DOI:

10.3791/306

October 1st, 2007

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La facilità di accessibilità di un embrione ha permesso per gli esperimenti di mappare i destini delle cellule utilizzando diversi approcci, tra cui pulcino di quaglia chimere ed etichettatura colorante focale. In questo articolo mostriamo un metodo di preparazione uovo che è stato ottimizzato per i lunghi tempi di sopravvivenza.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Lo studio di sviluppo è stato molto semplificato dall'uso del embrione di pollo come modello sperimentale. La facilità di accessibilità di un embrione ha permesso per gli esperimenti di mappare i destini delle cellule utilizzando diversi approcci, tra cui pulcino di quaglia chimere ed etichettatura colorante focale. Inoltre, consente di perturbazioni molecolare di diversi tipi, tra cui il posizionamento di proteine ​​rivestite perle e l'introduzione di DNA plasmidico mediante elettroporazione in ovo. Questi esperimenti hanno fornito dati importanti per lo sviluppo del sistema nervoso centrale e periferico. Per molti di questi studi, è necessario aprire il guscio d'uovo e richiudere senza perturbare la crescita dell'embrione. L'embrione può essere esaminata a successivi stadi di sviluppo con la riapertura del guscio d'uovo. Mentre ci sono diversi metodi eccellente per l'apertura di uova di gallina, in questo articolo si dimostra un metodo che è stato ottimizzato per i lunghi tempi di sopravvivenza. In questo metodo, l'uovo si basa su un lato e una piccola finestra è tagliata nella shell. Dopo la procedura sperimentale, la shell viene utilizzato per coprire l'uovo per la durata del suo sviluppo. Nastro in plastica trasparente sovrastante il guscio protegge l'embrione e aiuta a mantenere l'idratazione durante il resto del periodo di incubazione. Questo metodo è stato utilizzato a partire due giorni di incubazione e ha permesso la sopravvivenza attraverso matura età embrionale.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Rimuovere le uova da incubatore

  1. Mantenere a 37 ° C con umidità relativa di sopra del 60%.
  2. Rimuovere le uova; girare le uova 90 ° in modo che la base di grandi dimensioni si trova orizzontale.

2. Tampone uova di sterilizzare

  1. Saturare una pila di garza non sterile con 70% di etanolo.
  2. Utilizzare 2-3 pezzi per tampone fino a 5 uova. Scartare quando la garza è sporca.

3. Preparazione albume sito rimozione

  1. Tagliare e inserire un 1 pezzo "x 1" di nastro in plastica 3M appena lasciato la base per proteggere la zona dove l'albumina saranno tratti.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Questo metodo permette di lunghi tempi di sopravvivenza dopo manipolazioni sperimentali. Per esempio, dye-etichettatura studi hanno permesso la sopravvivenza di E10 o poi in uno studio di rilevamento destino (1). Inoltre, è stato utilizzato per gli studi in elettroporazione ovo che forniscono l'alterazione dei livelli di espressione genica e sviluppo necessari per procedere alle fasi successive di sviluppo (2-6). Questa tecnica finestre può essere utilizzato in combinazione con qualsiasi procedura che richiede la sopravvivenza dopo le m.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Incubatore ProfiMaintain a 37 gradi Gradi con umidità relativa superiore al 60%
70 % Garza
3M nastro di plastica
10cc siringa 1/uovo
18G aghi 1½ ago da pollice, 1/siringa
da dissezione4 "lame dritte affilate
Uova fecondate
rotante EtOH Forbici

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).
  2. Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).
  3. Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).
  4. Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).
  5. Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).
  6. Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).
....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Chicken Egg WindowingEgg PreparationEmbryo ManipulationAlbumin ExtractionShell SealingTape ApplicationDevelopmental StudiesIn Ovo ProceduresEgg HandlingEmbryo Survival

Related Articles