Un metodo per indurre l'infiammazione della superficie oculare in un modello murino

Abstract

Fonte: Singh, J., et al. Induzione dell'infiammazione della superficie oculare e raccolta dei tessuti coinvolti. J. Vis. Exp. (2022)

Questo video dimostra un metodo per indurre l'infiammazione della superficie oculare e la disfunzione della ghiandola di Meibomio in un modello murino. La stimolazione del sistema immunitario del topo utilizzando un immunogeno e la successiva restimolazione con lo stesso immunogeno promuovono l'infiammazione della superficie oculare, che provoca l'ostruzione della secrezione della ghiandola di Meibomio attraverso gli aggNET prodotti dai neutrofili e porta alla malattia dell'occhio secco.

Protocol

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Induzione dell'infiammazione della superficie oculare murina

1. Eseguire la preparazione dell'immunogeno per l'immunizzazione.
   1. Preparare l'immunogeno fresco il giorno dell'immunizzazione, mescolando l'ovoalbumina (OVA, 50 mg/mL) e la tossina della pertosse (100 μg/mL) in soluzione fisiologica e l'adiuvante idrossido di alluminio (40 mg/mL) (vedi Tabella dei materiali) in una proporzione 1:1.
      ca....

Results

Figura 1: Escissione del tessuto facciale che circonda la regione orbitale.Il percorso di incisione è indicato in rosso. Ciò consente di asportare gli organi oculari e di studiare l'influenza e gli effetti di varie terapie somministrate localmente su organi oculari accessori come la congiuntiva e la cornea.

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Gibco
Idrossido di alluminio	Imject allume adiuvante	Codice: 77161	40 mg/mL Concentrazione finale: in vivo: 1 mg/ 100 μL
Topi C57Bl/6, di età compresa tra 7 e 9 settimane	Laboratori del fiume Charles
Pinze curve	FST di Dumont SVIZZERA	5/45 11251-35
Forbice affilata fine	FST Acciaio inossidabile, Germania	Codice 15001-08
Armadio di sicurezza laminare	Herasafe
NaCl 0,9% (soluzione salina)	B.Braun
Ovoalbumina (OVA)	Endofit, Invivogen	9006-59-1	10 mg/200 μl in soluzione salina
Tossina della pertosse	ThermoFisher Scientifico	PHZ1174	50 μg/ 500 μL in soluzione salina Concentrazione finale: in vivo: 100 μg/ 100 μL
Petridish	Greiner bio-one	Codice 628160
bisturi	Bisturi monouso in piuma	n. 21	Concentrazione finale: in vivo: 300 ng/ 100 μL
Stereomicroscopio	Zaiss	Stemi508
Siringa (lavaggio corneale/iride)	BD Microlane	27 G x 3/4 - Nr.20 0,4 x 19 mm
Siringa (i.p immunizzazione)	BD Microlane	24 G1"-NR 17, 055* 25 mm