Una tecnica per valutare la risposta immunitaria contro un antigene inducendo l'infiammazione della pelle

Abstract

Fonte: Yao, Y., et al. Imaging intravitale del priming dei neutrofili utilizzando IL-1β Promoter-driven DsRed Reporter Mice. J. Vis. Exp. (2016).

Questo video dimostra una tecnica in vivo per valutare un antigene di prova inducendo un'infiammazione cutanea in un modello murino. L'antigene del test, un aptene in una soluzione di olio/acetone, viene applicato localmente sulla pelle dell'orecchio del topo e l'infiammazione della pelle viene valutata dopo un periodo adeguato.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Induzione dell'infiammazione cutanea nei topi pIL1-DsRed

1. Anestetizzare il topo mediante iniezione intraperitoneale (i.p.) di un cocktail anestetico contenente 100 mg/kg di ketamina, 10 mg/kg di xilazina e 1 mg/kg di acepromazina. I topi adeguatamente anestetizzati non mostrano il ritiro della zampa posteriore per pizzicare le dita dei piedi.
2. Applicare la crema depilatoria sulla superficie dorsale di entrambe le orecchie del topo. Attendere da 30 secondi a 1 minuto. Pulire la superficie dell'orecchio con cotone bagnato con acqua e lasciare asciugare all'aria.
3. Misurare lo spessore dell'orecchio utilizzando un micrometro e riporre il mouse in una gabbia separata. Osservare fino al recupero dall'anestesia (~ 15 - 30 min). Per risolvere l'infiammazione della pelle indotta dal prodotto per la depilazione, lasciare riposare il topo per 3 giorni prima di eseguire ulteriori sperimentazioni.
4. Preparare l'1,25% (p/v) di oxazolone (OX) sciogliendo 16,7 mg di OX in 1 ml di acetone e mescolando 750 μl di soluzione di OX/acetone con 250 μl di olio d'oliva. Preparare la soluzione del veicolo mescolando 750 μl di acetone con 250 μl di olio d'oliva.
5. Rianestetizzare il topo mediante iniezione intraperitoneale (i.p.) di cocktail anestetico (1.1). Misurare lo spessore dell'orecchio come prima.
6. Applicare 12,5 μl di OX all'1,25% su ciascun lato dell'orecchio destro. Applicare 12,5 μl di soluzione di acetone/olio d'oliva su ciascun lato dell'orecchio sinistro.
7. Tenere il topo separato dai compagni di gabbia fino a quando non si è completamente ripreso per evitare insulti alle sue orecchie da parte di altri topi, quindi rimettere il topo nella sua gabbia originale e riportarlo alla struttura di stabulazione degli animali><. nota: La depilazione può provocare una lieve infiammazione della pelle seguita da un cambiamento dello spessore dell'orecchio. Questa infiammazione minore si risolverà 3 giorni dopo, confermata dal normale spessore dell'orecchio. Dopo l'applicazione topica per 24 ore, le orecchie trattate con OX mostrano un gonfiore significativo (p < 0,01) rispetto alle orecchie trattate con la sola soluzione del veicolo.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Cloridrato di ketamina	Hospira	NDC 0409-2051-05
Xilazina	Laboratorio LLOYD	NADA #139-236
Acepromazina	Boehringer Ingelheim	ANADA 200-361
Crema depilatoria	Chiesa e Dwight
acetone	Fisher Scientifico	A16P4
Oxazolone	Sigma-Aldrich	E0753