Generazione di una ferita cutanea escissionale in un modello murino tramite biopsia a punzone

Abstract

Fonte: Anderson, L. S. et al., Un modello murino per valutare la risposta immunitaria innata all'infezione da Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2019)

Questo video mostra una procedura di biopsia del punzone per creare una ferita precisa in un modello murino. L'escissione espone lo strato sottocutaneo della pelle, fornendo un sito adatto per lo studio delle risposte immunitarie all'infezione patogena localizzata.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Sorgente del mouse e alloggiamento

1. Derivare topi con proteina fluorescente verde potenziata con lisozima M (LysM-eGFP) su un background genetico C57BL/6J come descritto in precedenza. Derivare i topi LysM-EGFP× della risposta primaria 88 (MyD88)-/- della differenziazione mieloide incrociando topi LysM-EGFP con topi MyD88-/- su uno sfondo C57BL/6J.
2. Domestico i topi in un vivaio. Per questi studi, gli animali sono stati alloggiati presso l'Università della California, Davis in gruppi prima dell'intervento chirurgico e alloggiati singolarmente dopo l'intervento chirurgico. Usa topi di età compresa tra 10 e 16 settimane.

2. Ferite cutanee escissionali

1. Somministrare 100 μL di 0,03 mg/mL di buprenorfina cloridrato (~0,2 mg/kg) a ciascun topo tramite iniezione intraperitoneale.
2. Venti minuti dopo l'iniezione, mettere 2-4 topi in una camera con 2-3 litri al minuto (LPM) di ossigeno con isoflurano al 2-4%. Una volta che i topi sono completamente anestetizzati, trasferire i topi uno alla volta in un cono nasale collegato a 2-3 LPM di ossigeno con isoflurano al 2-4%. Verificare che i topi siano completamente anestetizzati pizzicando con decisione ciascuna zampa posteriore tra il pollice e l'indice. Procedi al passaggio successivo se l'animale non risponde al pizzico.
3. Radi una sezione di 1 pollice per 2 pollici sul retro del mouse con un tagliaunghie elettrico e pulisci l'area dai ritagli di pelo usando una salvietta pulita o una garza. Evita di usare la lozione depilatoria perché potrebbe causare un'infiammazione eccessiva.
4. Pulisci prima il dorso del mouse con una garza imbevuta di iodio povidone al 10% e poi con una garza imbevuta di etanolo al 70%. Pulire l'area a spirale, spostandosi verso l'esterno dal centro dell'area chirurgica. Attendere circa 1 minuto affinché l'area chirurgica si asciughi prima dell'intervento.
5. Tenere il dorso rasato del mouse senza stringere tra due dita e premere con decisione una biopsia sterile con punch da 6 mm al centro dell'area chirurgica preparata. Non tendere la pelle.
   1. Ruotare la biopsia del punzone per creare un contorno circolare sulla pelle che tagli completamente la pelle in almeno una sezione del contorno. Fare attenzione a non tagliare la fascia o il tessuto sottostante.
   2. Utilizzare forbici e pinze sterili per tagliare l'epidermide e il derma seguendo lo schema circolare impresso dalla biopsia del punzone.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Punzone per biopsia monouso da 6 mm	Integra Miltex	33-36
Buprenoprina cloridrato iniettabile	Forniture mediche occidentali	Codice: 7292	0,3 mg/mL
C57BL/6J Mouse	Jackson Labratory	664
Topi LysM-eGFP	Thomas Graff Albert Einstein College di New York	Na
MyD88 KO Mouse	Jackson Labratory	Codice: 9088
Spugne in tessuto non tessuto	AMD- Ritmed Inc	A2101-CH	5 cm x 5 cm
Soluzione di iodio povidone al 10%	Aplicare	697731