Una tecnica di imaging per studiare la risposta al calcio nelle cellule infettate da batteri

Abstract

Fonte: Smail, Y., et al. Imaging Ca²⁺ Responses During Shigella Infection of Epithelial Cells. J. Vis. Exp. (2018).

Questo video dimostra una tecnica per rilevare la risposta locale e globale degli ioni calcio all'infezione da Shigella di cellule epiteliali umane. La shigella invade le cellule ospiti e rilascia effettori di invasione, influenzando i livelli di calcio intracellulare. L'ampiezza e la frequenza del calcio citosolico locale e globale sono studiate utilizzando un indicatore fluorescente.

Protocollo

1. Preparativi

1. Preparazione dei batteri
   1. Placcare i batteri, ceppo selvatico di Shigella che esprime l'adesina AfaE (M90T-AfaE), su una piastra di agar di soia tripticasica (TCS) contenente lo 0,01% di rosso Congo (CR) e incubarli per 18 ore a 37 °C.
      nota: Per aumentarne la riproducibilità, le piastre di Shigella ottenute al punto 1.1.1 vengono conservate a 4 °C e devono essere utilizzate entro una settimana perché tutte le colonie su terreno CR finiranno per diventare rosse nel tempo.
   2. Inoculare la pre-coltura del brodo TCS prelevando 3 colonie rosse dalle pi....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Fluo-4 AM	Invitrogen	F14201
Metamorph versione 7.7	Imaging universale
Sistema di illuminazione CoolLED pE-2	Roper Scientifico
Micro-piatto 35 mm, alto	IBIDI	Codice 81156
Brodo di soia tripticasica (TCS)	Thermofisher	B11768
TCS agar	Thermofisher	B11043
Rosso Congo	Sigma-Aldrich	Codice 75768
M90T-AFAE	Sun et al. 2017		Shigella flexneri sierotipo V. che esprime l'adesina AfaE
ipgD-AfaE	Sun et al. 2017		Ceppo isogenico mutante ipgD che esprime l'adesina AfaE