Analisi delle sinapsi immunitarie tra cellule T umane e cellule Raji caricate con SEB mediante citometria a flusso di imaging

Abstract

Fonte: Wabnitz, G. et al., Analisi qualitativa e quantitativa della sinapsi immunitaria nel sistema umano utilizzando la citometria a flusso di imaging. J. Vis. Exp. (2019)

Questo video analizza la formazione di sinapsi immunitarie tra le cellule T nelle preparazioni di pan-leucociti non purificate e le cellule di Raji caricate con Staphylococcus aureus enterotossina B. L'arricchimento di CD3 e F-actina è osservato nella sinapsi immunitaria utilizzando la citometria a flusso di imaging.

Protocollo

Tutte le procedure che prevedono la raccolta dei campioni sono state eseguite in conformità con le linee guida IRB dell'istituto.

1. Preparazione dei Pan-leucociti

1. Prelevare 1 mL di sangue periferico da un donatore sano (o paziente) in una siringa eparinizzata. Assicurati di avere l'approvazione del comitato etico competente per la donazione di sangue.
2. Miscelare 1 mL di sangue periferico umano con 30 mL di tampone di lisi ACK (150 mM NH₄Cl, 1 mM KHCO₃ e 0,1 mM EDTA, pH 7,0) in una provetta da 50 mL e incubare per 8 minuti a temperatura ambiente.
3. Riempire....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Multifuge 3 SR	Heraeus
RPMI 1640	Tecnologie di vita	#11875085	500 ml
Fcs	Pan Biotech #3302-P101102
Tubo a fondo tondo in polistirene	Falcone	#352054	5 ml
Soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco	sigma	D8662
Albumina sierica bovina	Roth	#8076.3
saponina	sigma	S7900
Paraformaldeide	Sigma Aldrich	#16005
Perlina di velocità	Amnis	#400041
Minishaker MS1	IKA Funziona	MS1
Piastra per microtitolazione	Greiner Bio Uno	#650101	96U
Enterotossina SEB	Sigma Aldrich	S4881
DAPI	Sigma Aldrich	D9542	Rapporto da uno a tremila
CD3-PETxR	Invitrogen	MHCD0317	Rapporto da uno a trenta
Falloidina-AF647	Sonde molecolari	Codice A22287	Rapporto di uno a uno cinquanta
IS100	Amnis		Citometro a flusso per immagini
Idee	Amnis		software
ispirare	Amnis		software