Una tecnica per generare anticorpi monoclonali da cellule B antigene-specifiche

Abstract

Fonte: Devilder, M., et al. Generazione di anticorpi monoclonali umani discriminanti da rare cellule B specifiche per l'antigene circolanti nel sangue. (2018).

Il video mostra una tecnica per generare anticorpi monoclonali da cellule B antigene-specifiche. I vettori di espressione eucariotici che codificano per le catene pesanti e leggere di anticorpi, clonati da cellule B isolate antigene-specifiche, vengono introdotti nelle cellule di mammifero utilizzando poliplex. Una volta all'interno delle cellule, questi vettori subiscono la traduzione e i peptidi a catena pesante e leggera risultanti si assemblano in anticorpi, che vengono successivamente secreti dalle cellule.

Protocollo

1. Produzione di anticorpi monoclonali

1. Il giorno prima della trasfezione, è stato seminato 15.000 cellule di rene embrionale umano 293A (HEK 293A) in 200 μL di terreno Eagle modificato (DMEM) di Dulbecco integrato con il 10% di FBS per pozzetto in piastre da 96 pozzetti. Incubare per una notte in un incubatore di CO₂ (5% CO₂) a 37 °C.
2. Cotrasfettare le cellule 293A in terreno DMEM contenente il 10% di FBS utilizzando un derivato lineare della polietilenimmina come reagente di trasfezione.
   nota: Eseguire la trasfezione in triplice copia. Il seguente protocollo è per un pozzetto di una p....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Linea cellulare HEK 293A	Thermo Fisher scientifico	Codice: R70507
DMEM (1X) Aquila modificata di Dulbecco media	Tecnologie Gibco by life	Codice 21969-035	(+) 4,5g/L D-Glucosio 0,11g/L Piruvato di Sodio (-) L-Glutmina
Nutridoma-SP	Roche	11011375001	100X Conc
Siero fetale bovino (FBS)	Dominique Dutscher	S1810-500
Reagente per trasfezione di DNA Jet PEI	PolyPlus	101-40
Piastra a fondo piatto96 pozzetti	Falcone	353072
Piastra a 96 pozzetti con fondo a V	Nunc/Thermofisher	Codice: 55142