Una tecnica di imaging PET in vivo per rilevare tumori in un modello murino utilizzando anticorpi radiomarcati

Abstract

Fonte: Zeglis, B. M., et al. La bioconiugazione e la radiosintesi di ⁸⁹anticorpi marcati con Zr-DFO. J. Vis. Exp. (2015).

Questo video dimostra una tecnica che coinvolge un radioimmunoconiugato per l'imaging in vivo di un tumore in un modello murino. Dopo l'iniezione del radioimmunoconiugato, gli anticorpi del coniugato si legano a uno specifico antigene di membrana sulle cellule tumorali. Il radiotracciante del coniugato emette positroni che interagiscono con gli elettroni vicini per produrre energia, che viene rilevata da uno scanner per tomografia a emissione di positroni (PET) per creare un'immagine del tumore.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Imaging PET in vivo con ⁸⁹Zr-DFO-J591

ATTENZIONE: Questa fase del protocollo prevede la manipolazione e la manipolazione della radioattività. Prima di eseguire questi passaggi, i ricercatori dovrebbero consultare il Dipartimento di Sicurezza Radiologica della loro istituzione di origine. Devono essere prese tutte le misure possibili per ridurre al minimo l'esposizione alle radiazioni ionizzanti.

1. Nei topi nudi atimici maschi, impiantare per via sottocutanea 5 x 10⁶ cellule tumorali del carcinoma linfonodale della prostata (LNCaP) e lasciarle crescere fino a uno xenotrapianto di 100-150 mm³ (3-4 settimane dopo l'inoculazione).
2. Diluire il radioimmunoconiugato ⁸⁹Zr-DFO-J591 a una concentrazione di 1,0 mCi/ml in soluzione fisiologica sterile allo 0,9%.
3. Iniettare 200 μl della soluzione ⁸⁹Zr-DFO-J591 (DFO = desferrioxamina, J591 = antigene di membrana specifico della prostata [PSMA] targeting anticorpale) (200 μCi; 7,4 MBq) nella vena caudale laterale dei topi portatori di xenotrapianto.
4. Al momento dell'imaging desiderato (ad es. 12, 24, 48, 72, 96 o 120 ore dopo l'iniezione), anestetizzare il topo con una miscela di isoflurano al 2%: ossigeno gassoso.
5. Posizionare il mouse sul letto dello scanner PET per piccoli animali e mantenere l'anestesia durante la scansione utilizzando una miscela di isoflurano all'1%: ossigeno gassoso. Prima di posizionare l'animale sul letto dello scanner, verificare l'anestesia utilizzando il metodo del pizzicamento delle dita dei piedi e applicare un unguento oftalmico sugli occhi del topo per evitare l'essiccazione durante l'anestesia.
6. Acquisire i dati PET per il topo tramite una scansione statica con un minimo di 40 milioni di eventi coincidenti utilizzando una finestra di energia di 350-700 keV e una finestra temporale di coincidenza di 6 nsec.
7. Dopo aver completato l'acquisizione dell'immagine, non lasciare il topo incustodito e non metterlo in una gabbia con altri topi fino a quando non ha ripreso conoscenza.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
p-SCN-Bn-DFO	Macrociclica	B-705	Conservare a -80 °C
[89Zr]Zr-ossalato	Vari, tra cui Perkin-Elmer	-	Attenzione: materiale radioattivo