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Articolo metodologico

Una tecnica in vivo per tracciare il traffico di cellule T indotte da anticorpi bispecifici nei tumori

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8 luglio 2025

In questo articolo

Abstract

Fonte: Espinosa-Cotton, M., et al. Monitoraggio del traffico di cellule T indotte da anticorpi bispecifici utilizzando cellule T umane trasdotte dalla luciferasi. J. Vis. Exp. (2023).

Questo video dimostra un metodo per tracciare il traffico di cellule T indotte da anticorpi bispecifici ai tumori in un modello murino. Le cellule T effettrici trasdotte dalla luciferasi vengono iniettate in un topo con uno xenotrapianto di cellule tumorali sottocutanee. Vengono quindi introdotti anticorpi bispecifici, legandosi alle cellule T e alle cellule tumorali. La localizzazione delle cellule T viene tracciata utilizzando l'imaging bioluminescente, con l'entità del segnale che indica l'entità dell'infiltrazione delle cellule T nel tumore.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Trasfezione di cellule 293T con luciferasi e raccolta di surnatante virale

  1. Coltura di cellule 293T
    1. Preparare i terreni aggiungendo quanto segue a un litro di terreno Eagle modificato (DMEM) di Dulbecco ciascuno: 110 ml di siero fetale bovino inattivato termicamente (FBS), 11 ml di penicillina-streptomicina.
    2. Scongelare 5 x 106 cellule 293T e trasferirle in un matraccio T175 con il terreno preparato com....

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Dichiarazioni

Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Celle 293TATCCCodice CRL-11268
BsaSigma AldrichA7030-10G
Perline CD3/CD28Gibco (ThermoFisher)Codice 11161D
D-luciferina, sale di potassioGoldbioFORTUNA-1G
DMEMGibco (ThermoFisher)11965092
Reagente di trasfezione del DNA in vitro (polyjet)Laboratori SignaGenSL100688
EdtaSigma AldrichE9884-100G
FBSGibco (ThermoFisher)10437028
Plasmide Gag/PolAddgeneCodice: 14887
Plasmide GFPAddgene11150-DNA.cg
Penicilina-StreptomicinaGibco (ThermoFisher)15140122
IL-2 umana ricombinanteSistemi di ricerca e sviluppo202-IL-010/CF
RetronicinaTakaraT100B
tripsinaGibco (ThermoFisher)25-300-120
Plasmide VSV-GAddgeneCodice: 8454

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