Infusione controllata di anticorpi specifici per il peptide Aβ e oligomeri Aβ nell'ippocampo del ratto

Abstract

Fonte: Sajadi, A., et al. La neurodegenerazione in un modello animale di infusione cronica di oligomeri amiloide-beta è contrastata dal trattamento con anticorpi infusi con pompe osmotiche. J. Vis. Exp. (2016).

Questo video mostra una tecnica per l'infusione continua di anticorpi specifici per il peptide amiloide-beta (Aβ) nell'ippocampo di un ratto. Lo studio prevede l'impianto di un sistema di cannule bilaterali per un'infusione controllata di anticorpi specifici per il peptide Aβ accoppiata all'infusione di oligomeri solubili di Aβ (Aβo) nell'ippocampo di ratto per studiare le interazioni tra gli oligomeri e gli anticorpi.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Preparazione del catetere prima della chirurgia stereotassica

1. Cateteri in PE50 tagliati (6 cm di lunghezza) che verranno utilizzati per collegare la cannula con le pompe osmotiche (vedi Figura 1). Riempire i cateteri PE50 con liquido cerebrospinale artificiale (aCSF) e sigillare entrambe le estremità dei cateteri. Conservare il catetere a 4 °C fino al momento dell'utilizzo.

2. ....

Risultati

Figura 1. Foto dell'animale con cannula bilaterale durante l'infusione di Aβo. Una soluzione di Aβo (0,2 μg/μl; 1 μl) è stata iniettata in ratti svegli e in movimento libero (una volta al giorno per 6 giorni) utilizzando cateteri PE50 collegati a una cannula interna inserita in una cannula guida. Il trattamento con anticorpi IgG1 o 6E10 di controllo (Ctl) è stato infuso direttamente .......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Liquido cerebrospinale artificiale (aCSF)	Apparato di Harvard	59-7316
Catetere PE50 a parete sottile	Plastica uno	C232CT
Ketamina cloridrato (100 mg/mL)	Bioniche	1989529
Xilaxina cloridrato (100 mg/mL)	Bimeda	8XYL004C
Meloxicam (5 mg/mL)	Norbrook	Codice 215670I01
Soluzione di clorexidina gluconato 2% e alcol isopropilico 2%	Carefusion	Codice 260100C
Lidocaina cloridrato	Alveda Pharma	0122AG01
Bupivacaina cloridrato	Hospira	Anno 1559
Unguento oftalmico	Baussh e Lomb inc.	2125706
Fotogramma stereotassico	Stoelting	Codice: 51600
Braccio porta cannula stereotassica	Apparato di Harvard	72-4837
trapano	Dremel	8050-N/18
Cannula guida	Plastica uno	326OPG/punto clinico
Cannula per iniezione	Plastica uno	C315I/punto clinico
Cannula fittizia	Plastica uno	C315DC/spc
Filo di sutura rivestito Vicryl Rapide 4-0	Ethicon	VR2297
Cemento acrilico dentale	Apparato di Harvard	72-6906
viteria	Azienda JI Morris	P0090CE125
Anticorpo 6E10 (isotipo IgG1 di topo)	BioLeggenda	803003
Anticorpo di controllo dell'isotipo IgG1 di topo	Abcam	AB18447
Pompe osmotiche Alzet modello 1007D	Società Durect	290
Isoflurano	Baxter	CA2L9100
Beta-amiloide 1-42	rPeptide	A-1163-1
Siringa Hamilton (10 μL)	Fisher Scientique	14815279
siringa per perfusione CMA 402	Apparato di Harvard	CMA8003110
Siringa 1 mL	Bd	309659
Ago 21G	Terumo	NN-2125R
rannicchiarsi	Lomir Biomedical	RTS04