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Un metodo di immunocolorazione multiplex che utilizza anticorpi primari della stessa specie ospite

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Lyu, Q., et al. Microonde e fluoroforo-tiramide per immunocolorazione multiplex su surrenali di topo - Utilizzando anticorpi primari non coniugati della stessa specie ospite. J. Vis. Exp. (2020).

Questo video mostra un test per eseguire l'immunocolorazione multiplex utilizzando anticorpi primari della stessa specie ospite. In questo metodo, una sezione di tessuto surrenale viene sottoposta a un processo di immunocolorazione in due fasi. Inizialmente, la sezione viene colorata con anticorpi specifici per i marcatori nella corteccia, seguita dalla rimozione dell'anticorpo legato e dalla ricolorazione con anticorpi specifici per i marcatori nel midollo.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tutte le procedure che prevedono la raccolta dei campioni sono state eseguite in conformità con le linee guida IRB dell'istituto.

1. Colorazione con il primo anticorpo

  1. Decerare e reidratare i vetrini inclusi in paraffina fissati in formalina (FFPE) con 5 minuti assegnati a ciascuna delle seguenti fasi: xilene o reagenti equivalenti 3x, 100% etanolo 2x, 95% etanolo 1x, 70% etanolo 1x, 50% etanolo 1x e acqua distillata 2x.
    nota: I vetrini devono rimanere umidi a partire da questa fase di reidratazione fino al montaggio nella fase finale.
  2. Per il recupero opzionale dell'antigene, po....

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Supporto di montaggio antisbiadimentoLaboratori VectorH-1000
Anti-topo d'asino biotinilatoJacksonImmuno715-066-151Diluizione 1:500
Asino biotinilato anti-coniglioJacksonImmuno711-066-152Diluizione 1:500
DAPIBioLeggenda4228012 μg/mL in acqua distillata
Microscopio a fluorescenzaecoRivoluzione 4
Streptavidina coniugata con perossidasi di rafanoJacksonImmuno016-030-084Diluizione 1:1000
Forno a microonde, 700WGeneral ElectricJEM3072DH1BB
Mouse anti-CYP2F2Santa CruzCodice SC-374540Diluizione 1:250
Mouse anti-THSanta CruzSC-25269Diluizione 1:1000
Siero d'asino normaleJacksonImmunoCodice 017-000-1212% di siero in PBST
Coniglio anti-20αHSDKerafast,EB4002Diluizione 1:500
Coniglio anti-3βHSDTransGenic,KO607Diluizione 1:250
Coniglio anti-THNovusNB300-109Diluizione 1:1000
Coniglio anti-β-cateninaAbcam,ab32572Diluizione 1:500
Streptavidina Rafano Perossidasi (SA-HRP)JacksonImmunoCodice 016-303-084Diluizione 1:1000
TSA Cy3 TiramidePerkinElmerSAT704B001EADiluizione 1:100
TSA Fluoresceina TiramidePerkinElmerSAT701001EADiluizione 1:100

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Multiplex ImmunostainingPrimary AntibodiesFluorophore TyramideAntibody StrippingAdrenal TissueCortex MedullaMicrowave Antigen RetrievalStreptavidin PeroxidaseNuclear StainingFluorescence Microscopy

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