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Articolo metodologico

Un metodo in vitro per identificare le cellule immunitarie innate e adattative che risiedono nei polmoni murini

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8 luglio 2025

In questo articolo

Abstract

Fonte: Christofides, A., et al. per l'identificazione delle cellule immunitarie innate e adattative del polmone murino. J. Vis. Exp. (2021).

Questo video dimostra una tecnica in vitro per identificare le cellule immunitarie che risiedono nei polmoni murini. Dopo aver isolato le cellule immunitarie bersaglio dal tessuto polmonare murino, queste vengono marcate in superficie utilizzando un cocktail di anticorpi marcati con fluorofori contro marcatori specifici su cellule immunitarie innate e adattative. Inoltre, i monociti, i macrofagi e le cellule dendritiche vengono marcati utilizzando un marcatore intracellulare. I vari tipi di cellule immunitarie vengono quindi identificati mediante citometria a flusso.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Escissione chirurgica e preparazione dei tessuti

  1. Eutanasia del topo iniettando per via intraperitoneale 1 ml di tribromoetanolo (preparato secondo il protocollo standard; Tabella dei materiali).
    nota: L'asfissia da CO2 deve essere evitata negli studi polmonari in quanto potrebbe causare lesioni polmonari e alterare le caratteristiche e le proprietà delle cellule immunitarie polmonari....

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Risultati

figure-results-1
Figura 1: La migliore dissociazione cellulare si ottiene con 5 mg/mL di collagenasi 1 in PBS preriscaldato + 0,5% BSA. In tutte le diverse condizioni, sono stati inclusi anche 0,2 mg di DNAsi I. Abbreviazioni: BSA = albumina sierica bovina; FSC-A = area di picco della luce diffusa in avanti; L/D = colorazione viva/morta; SF = Siglec F.

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Dichiarazioni

Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Stantuffo della siringa da 10 mLECCELLENTECodice 26265
Ferri da 18 gAgo di scorrimento di precisione BD305165
Ferri da 21 gAgo di scorrimento di precisione BD305195
Provette coniche da 50 mLFalcone3520
Filtro cellulare da 70 μmThermoFisher22363548
piastre a 96 pozzettiFalco/corningTelefono 3799
ACK Tampone di lisiThermoFisherCodice A10492-01
antitopo CD11bBioleggenda101215Per i dettagli vedere la Tabella 2
anti-topo CD11cBioleggenda117339 / 117337Per i dettagli vedere la Tabella 2
anti-topo CD45Bioleggenda103115Per i dettagli vedere la Tabella 2
anti-topo CD64Bioleggenda139319Per i dettagli vedere la Tabella 2
anti-topo CD68Bioleggenda137009Per i dettagli vedere la Tabella 2
anti-topo GR-1Bioleggenda108433Per i dettagli vedere la Tabella 2
anti-topo Siglec FBioleggenda155503Per i dettagli vedere la Tabella 2
AVERTINSigma-Aldrich240486
B220Bioleggenda103228Per i dettagli vedere la Tabella 2
Albumina sierica bovina (BSA)Sigma-Aldrich9048-46-8
CD103Bioleggenda121405 / 121419Per i dettagli vedere la Tabella 2
CD24Bioleggenda138503Per i dettagli vedere la Tabella 2
CD3Bioleggenda100205Per i dettagli vedere la Tabella 2
centrifuga
Collagenasi Tipo 1Worthington Biochemical CorpLS004196
CX3CR1Bioleggenda149005Per i dettagli vedere la Tabella 2
DNasi IMillipore Sigma10104159001
etanolo
F4/80Bioleggenda123133Per i dettagli vedere la Tabella 2
Blocco Fc (CD16/32)Bioleggenda101301Per i dettagli vedere la Tabella 2
Siero fetale bovinoSistemi di ricerca e sviluppo
Pinze seghettate finiRoboz Strumento Chirurgico Co
Foxp3 / Set di tamponi per colorazione con fattore di trascrizioneThermoFisher00-5523-00
Bisturi di sicurezza FuturaSistemi medici al meritoSMS210
Kit di macchie di cellule morte a lettura lontana riparabile Live/DeadThermoFisherL34973Per i dettagli vedere la Tabella 2
MERTKBioleggenda151505Per i dettagli vedere la Tabella 2
MHC-IIBioleggenda107621Per i dettagli vedere la Tabella 2
NK1.1Bioleggenda108705Per i dettagli vedere la Tabella 2
Agitatore orbitaleVWRModello 200
PetriFalcone351029
Centrifuga refrigerata da bancoSORVAL ST 16R
Piccola forbice curvaRoboz Strumento Chirurgico Co

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