Iniezione virale stereotassica per l'editing genico neuronale mirato nel cervello del topo

Abstract

Fonte: Fricano-Kugler, C. J., et al. Progettazione, confezionamento e consegna di CRISPR retrò e lentivirus ad alto titolo tramite iniezione stereotassica. J. Vis. Exp. (2016)

Questo video mostra l'iniezione virale stereotassica per un preciso editing genico neuronale nel cervello del topo. Il protocollo garantisce un'accurata consegna del virus al giro dentato, consentendo la marcatura fluorescente e il knockout genico mediato da CRISPR per studiare i circuiti neurali, la funzione genica e i meccanismi della malattia in vivo.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Iniezione stereotassica

1. Verificare che la ventilazione della sala operatoria sia aperta per garantire un flusso d'aria adeguato. Preparare il topo per l'intervento chirurgico anestetizzandolo con isoflurano al 4% in una camera di induzione. Dopo l'anestesia, radere la testa per preparare il sito di iniezione.
   1. Posiziona il mouse nello strumento stereotassico usando una pinzetta per spostare la lingua verso il basso e di lato. Inserisci la barra del morso ....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Stereotaxic Chirurgia Reagenti
Vet-Siringa veterinaria uso T.B. Siringa solo 1cc luer slip T.B. 100/bx	Med-Vet International	1CCVLS
Isoflurane
Lame per bisturi in acciaio inossidabile, #10, confezione da 100	Med-Vet International	JOR580S
Unguento lacrimale artificiale	Med-Vet International	RXPARALUBE-O
PVP PrepSolution	Med-Vet International	HPIV108208H
soluzione salina normale	Med-Vet International	DYND500MLSH
Applicatori con punta in cotone	Med-Vet International	CTA6
Unguento antibiotico triplo	Med-Vet International	RXTRIP-OI15
MONOJECT® Aghi Soft Pack 25g x 5/8"	Med-Vet International	25058
6-0 suture di seta	Med-Vet International	MV-711