Trattamento intracerebroventricolare con resiniferatossina per la desensibilizzazione di TRPV1 nel cervello di topo

Abstract

Fonte: Fukushima, A., et al. Trattamento intracerebroventricolare con resiniferatossina e test del dolore nei topi. J. Vis. Exp. (2020)

Questo video mostra la procedura per l'iniezione intracerebroventricolare di resiniferatossina nei topi per desensibilizzare i recettori TRPV1 nel cervello.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Iniezione intracerebroventricolare di RTX

1. Anesthetizzare i topi con sale sodico di pentobarbital (60 mg/kg, per via intraperitoneale) e verificare la perdita del riflesso di raddrizzamento.
2. Per il trattamento intracerebroventricolare (i.c.v.), iniettare 5 μL di resiniferatossina (RTX) (20 μg/mL) nel ventricolo laterale destro. Per il gruppo di controllo, iniettare il mezzo disperdente (10% etanolo, 10% poliossietilene (20) monooleato di sorbitano e 80% liquido cerebrospinale artificiale (ACSF)) nello stesso modo.
   1. Far passare un ago monouso da 27 G attraverso un tubo metallico (0,8 mm I.D.) per esporre la punta dell'ago da 3,0-3,5 mm (Figura 1A).
   2. Disinfettare la testa del topo con alcol al 70% e tenere saldamente le ossa squamose del topo con le dita (Figura 1B). nota: Prestare attenzione alle posizioni delle sporgenze squamose, poiché queste sporgenze serviranno come punti di riferimento per l'iniezione.
   3. Sposta l'ago lateralmente sul cuoio capelluto e trova la sutura sagittale poiché la punta dell'ago è agganciata alla sutura.
   4. Sposta la punta di circa 1 mm a destra, quindi sposta la punta rostralmente e trova la sutura coronale. (Figura 1B).
   5. Inserire l'ago lentamente e verticalmente, iniettare la soluzione RTX in circa 10 secondi e tenerlo premuto per circa 10 secondi.
   6. Estrarre lentamente l'ago e riportare il topo nella sua gabbia di casa. Il sanguinamento è solitamente minimo o assente. Se si verifica un sanguinamento importante, deve essere preso in considerazione l'uso di un altro topo.

Risultati

Figura 1: Viste fotografiche e schematiche dell'iniezione intracerebroventricolare (i.c.v.). (A) Ago utilizzato per l'iniezione endovenosa. (B) Schema del cranio del topo e movimento della punta dell'ago. Le...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Resiniferatoxin	LKT Laboratories	R1774	utilizzato per i pretrattamenti s.c./i.c.v. e il test RTX
Pentobarbital sale sodico	Tokyo Chemical Industry	P0776	utilizzato per l'anestesia
Etanolo (99.5%)	Wako Pure Chemical Industries	057-00456	utilizzato per la dissoluzione di RTX
Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate	Wako Pure Chemical Industries	161-21621	utilizzato per la dissoluzione di
RTX 25 mL Microsyringe	Hamilton	1702LT	utilizzato per iniezione endovenosa
Ago monouso calibro 26	TERUMO	NN-2613S	utilizzato per iniezione endovenosa