Valutazione degli effetti neuroprotettivi del postcondizionamento acido in un modello murino di ischemia cerebrale

Abstract

Fonte: Zheng, Y., et al. Modelli sperimentali per studiare la neuroprotezione del postcondizionamento acido contro l'ischemia cerebrale. J. Vis. Exp. (2017)

Questo video mostra l'applicazione del postcondizionamento acido (APC) per valutare i suoi effetti neuroprotettivi contro il danno ischemico in un modello murino di occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO). Delinea le fasi coinvolte nella riperfusione nel modello MCAO e l'applicazione dell'APC durante la riperfusione per mitigare l'eccitotossicità, lo stress ossidativo e la morte neuronale.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO):
   1. Posiziona e fissa il topo anestetizzato (con sonda di flussimetria laser doppler (LDF) attaccata al cranio) in posizione supina e mantieni la sua temperatura corporea utilizzando una lampada termica durante l'intervento. Disinfettare il collo con alcool etilico al 70%.
   2. Praticare un'incisione cutanea paramediana nel collo usando un bisturi; sezionare smussate i tessuti molli con una pinza per esporre i vasi. Aggiungi una goccia di soluzione salina ai tessuti esposti per mantenerli idratati.
   3. Sezionare l'arteria carotide comune dal tessuto circostante e dal nervo vago utilizzando una pinza oftalmica. Fare attenzione a non danneggiare il nervo vago. Disinfettare nuovamente la pelle del collo con iodoforo dopo che l'arteria carotide comune è stata esposta.
   4. Posizionare un morsetto per microvasi all'estremità distale dell'arteria carotide comune e quindi legare un nodo morto con suture di seta 6-0 all'estremità prossimale. Posizionare il morsetto il più prossimalmente possibile per le operazioni successive. Assicurarsi che la lunghezza del recipiente tra il morsetto e il nodo morto sia la più lunga possibile per le operazioni successive.
   5. Realizzare una sutura temporanea prossimale al morsetto legando un nodo sciolto. Assicurarsi che ci sia spazio sufficiente tra i due nodi per l'inserimento del monofilamento.
   6. Praticare una piccola incisione longitudinale tra i due nodi con le forbici micro-oftalmiche. Assicurarsi che l'incisione sia il più vicino possibile al nodo morto per le operazioni successive. Fare attenzione a non tagliare il recipiente.
   7. Inserire un monofilamento smussato con la punta da 12 mm attraverso l'incisione per entrare nel lume dell'arteria e farlo avanzare di alcuni mm. Stringere il nodo sciolto attorno alla punta del monofilamento e quindi rimuovere il morsetto.
   8. Far avanzare il filamento nell'arteria carotide interna (10 mm per occludere l'arteria cerebrale media) con una pinza oftalmica fino a quando il software LDF mostra un forte calo (riduzione del >80% rispetto al flusso sanguigno basale) del flusso sanguigno. Registrare l'ora di inizio dell'occlusione.
   9. Occludere l'arteria cerebrale media per 1 ora. Tagliare la sonda LDF e mettere i topi in un'incubatrice a 30 °C per tutta la durata dell'occlusione.
2. Riperfusione e Postcondizionamento Acido (APC):
   1. Ri-anestetizzare gli animali con isoflurano come descritto sopra, 55 minuti dopo l'orario di inizio dell'occlusione. Posiziona e fissa i topi in posizione supina. Aprire l'incisione del collo e riesporre l'arteria carotide comune.
   2. Estrarre delicatamente il filamento con una pinza oftalmica dopo il periodo di occlusione per ottenere la riperfusione e trasformare la sutura temporanea in una permanente stringendo il nodo.
   3. Per il trattamento dell'acidosi, sostituire il gas inalato dal cono anteriore con la miscela di gas contenente il 20% di CO₂, il 20% di O₂ e il 60% di N₂ per 5 minuti a 5, 50 o 100 minuti dopo la riperfusione. Chiudere l'incisione con una sutura chirurgica interrotta.
   4. Mettere i topi in una gabbia a 30 °C fino a quando i topi non riprendono conoscenza, quindi rimettere i topi in gabbie pulite e individuali. Fornisci ai topi una capsula di Petri con acqua e cibo inumidito. Monitora attentamente i topi dopo l'intervento chirurgico per dolore eccessivo e morte.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Laser Doppler Flowmetry	Moor Instruments Ltd	Model Moor VMS-LDF2
Etere dietilico anidro	Sinopharm Chemical Reagent Corporation	80059618
Trichloroacetaldehycle hydrate	Società di reagenti chimici Sinopharm	30037517