Effetti del blocco ganglio simpatico indotto dall'etanolo sulla rigenerazione nervosa in un modello canino

Abstract

Fonte: Shionoya, Y., et al. Applicazioni del blocco del ganglio simpatico cervicale indotte da etanolo per promuovere la rigenerazione del nervo alveolare inferiore canino utilizzando un nervo artificiale. J. Vis. Exp. (2018)

Questo video mostra un modello canino per la rigenerazione del nervo alveolare inferiore (IAN) utilizzando un'impalcatura biodegradabile e un blocco simpatico indotto dall'etanolo. La procedura prevede l'accesso chirurgico al ganglio simpatico cervicale e l'iniezione di etanolo per indurre la vasodilatazione. Il conseguente aumento del flusso sanguigno al sito della lesione, combinato con la rigenerazione assonale guidata da cellule di Schwann, favorisce la rigenerazione dei nervi.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Anestesia e preparazione della pelle

Anestetizzare il cane con una miscela di 5 mg/kg di ketamina cloridrato e 1 mg/kg di xilazina mediante iniezione intramuscolare.
Intubare con un tubo tracheale di 7,5 mm di diametro e 25 cm di lunghezza.
Posizionare il cane nella posizione laterale corretta. Mantenere l'anestesia generale con il 3,2% di sevoflurano con ossigeno (1,0 L/min).
Utilizzare un termoforo per mantenere la temperatura corporea a 37 °C.
Applicare un gel oftalmico sulla superficie anteriore degli occhi per evitare l'abrasione corneale.
Radere accuratamente il campo chirurgico (zona toracica sinistra) utilizzando un tagliaunghie. Spruzzare una notevole quantità di soluzione alcolica sul sito operatorio. Attendere almeno 15 secondi. Ripetere l'applicazione 3 volte.
Registra la frequenza cardiaca e la saturazione di ossigeno durante l'intervento chirurgico.

2. Ricostruzione del nervo alveolare inferiore utilizzando una provetta di collagene dell'acido poliglicolico (PGA-C): sviluppo del modello di sola ricostruzione

Iniettare 3 ml di lidocaina all'1% utilizzando un ago da 27 G nella gengiva mandibolare sinistra come anestetico locale e analgesico.
Eseguire un'incisione trasversale di 5 cm con una lama di bisturi numero 15 nella gengiva mandibolare sinistra per esporre la mandibola dell'animale.
Utilizzare vibrazioni ultrasoniche piezoelettriche per macinare l'aspetto prossimale della mandibola in un rettangolo di 3 cm × 8 mm attraverso il forame mentoniero posteriore.
NOTA: La frequenza di vibrazione era 28 \u2012 32 kHz.
Rimuovere la parte frontale della placca ossea mandibolare (dimensioni, 3 cm × 8 mm) per esporre l'IAN sinistro (Figura 1A).
NOTA: Il sito di ricostruzione corrisponde all'apice della radice del primo molare
Collegare l'IAN con un bisturi per rimuovere un segmento di 10 mm.
Inserire i monconi prossimali e distali del nervo reciso nel tubo nervoso a una profondità di 2 mm.
Usa 8-0 suture in nylon e un microscopio operatorio con ingrandimento 8X per suturare il tubo alle estremità nervose prossimali e distali (Figura 1B).
Riportare la placca ossea nella sua posizione originale nella mandibola.
Chiudere la ferita con punti di sutura in nylon 4-0.
Un giorno dopo l'intervento, verificare che la placca ossea mandibolare sia nella sua posizione corretta.
1. 4.10.1 Esegui l'imaging con tomografia computerizzata (TC) dell'osso facciale sotto anestesia. Impostare i parametri CT come segue: 120 kVp, 200 mAs, 0,5 mm/s, spessore della fetta di 0,5 mm.
  1. Somministra l'anestesia utilizzando una miscela di 5 mg/kg di ketamina cloridrato e 1 mg/kg di xilazina (Figura 2).
Somministrare ampicillina (100 mg/die) come antibiotico e paracetamolo (100 mg/die) come analgesico per una settimana dopo l'intervento chirurgico.

3. Blocco del ganglio simpatico cervicale indotto da etanolo (CSGB): sviluppo del modello di ricostruzione + CSGB

Eseguire la ricostruzione IAN come descritto nella sezione 2 e attendere una settimana per il recupero.
Anestetizzare l'animale con sevoflurano all'1,5% in ossigeno (4 L/min) e aria (6 L/min). Radere e pulire il campo chirurgico previsto, come descritto nel paragrafo 3.
Segna la linea di incisione con un pennarello cutaneo chirurgico tracciando una linea sulla zona del torace sul lato sinistro (Figura 3, la linea di incisione è lunga 20 cm).
Iniettare 5 ml di lidocaina all'1% utilizzando un ago da 21 G nell'area del torace sul lato sinistro come anestetico locale e analgesico.
Incidere la pelle del torace sul lato sinistro con una lama di bisturi numero 10.
Incidere lo strato di grasso con un bisturi elettrico per esporre la fascia muscolare.
Esporre il muscolo dentato ventrale e il muscolo scaleno.
Sollevare il muscolo dentato ventrale e il muscolo scaleno da ventrale a dorsale per esporre la seconda e la terza costola (Figura 4).
Eseguire una toracotomia laterale sinistra al secondo e terzo spazio intercostale per esporre il ganglio simpatico cervicale sinistro (Figura 5).
Iniettare 0,2 mL di etanolo al 99,5% nel ganglio simpatico cervicale utilizzando un ago da 30 G sotto visualizzazione diretta (Figura 6).
Chiudere lo spazio intercostale con punti riassorbibili 1-0 interrotti.
Chiudere la pelle con punti di nylon 3-0 interrotti.
Somministrare ampicillina (100 mg/die) come antibiotico e paracetamolo (100 mg/die) come analgesico per una settimana dopo l'intervento chirurgico.
A 1 settimana dopo il CSGB, misurare la temperatura della pelle del viso con la termografia a infrarossi per confermare il CSGB.

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Risultati

Figura 1: Nervo alveolare inferiore sinistro (IAN) prima e dopo la ricostruzione. A) Immagine pre-ricostruzione dell'IAN sinistro dopo essere stato esposto dal rimozione dell'osso. B) Immagine post-ricostruzion...