Formulazione di un sistema di trasporto di esosomi caricato con dopamina

Abstract

Fonte: Yavuz, B., et al. Formulazione e caratterizzazione di un sistema di trasporto della dopamina basato su esosomi. J. Vis. Exp. (2022)

Questo video mostra la formulazione di esosomi caricati con dopamina, concentrandosi sulla permeabilizzazione della membrana indotta da saponina per migliorare l'incapsulamento della dopamina all'interno degli esosomi.

Protocollo

1. Caricamento della dopamina negli esosomi

NOTA: Dopo aver completato la caratterizzazione degli esosomi delle cellule staminali mesenchimali Jelly di Wharton (WJ-MSC), gli esosomi caricati con dopamina sono stati ottenuti come sistema di somministrazione di farmaci. Il caricamento del farmaco negli esosomi viene eseguito utilizzando il metodo di incubazione.

1. Aggiungere 3 mL di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) alla sospensione dell'esosoma. Sterilizzare la sospensione diluita mediante filtrazione utilizzando filtri da 0,22 μm. Trasferire 500 μl della sospensione esosomiale sterilizzata in un'altra provetta.
2. Preparare una soluzione di dopamina (0,5 mg/mL) con acqua distillata. Aggiungere 500 μl di soluzione di dopamina nelle provette contenenti gli esosomi.
3. Aggiungere saponina alla sospensione al passaggio 1.2. Incubare la sospensione di esosoma dopamina preparata per 24 ore a 37 °C. NOTA: La concentrazione di saponina non deve superare lo 0,002% della soluzione totale.
4. Ultracentrifugare la sospensione a 90.000 × g per 70 minuti per rimuovere la dopamina e la saponina libere dal terreno. Conservare gli esosomi isolati a -20 °C fino all'uso per ulteriori analisi. nota: Aggiungere lo 0,02% di acido ascorbico per la stabilità della soluzione di dopamina preparata.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
0.22 μm filtro a membrana	Aisimo		Utilizzato per il processo di sterilizzazione
15 mL Falcon tube	Nest		Utilizzato nella coltura cellulare 50
mL Falcon tube	Nest		Utilizzato in cella fase di coltura
Centrifuga	Hitachi	CF16RN	Utilizzato nella fase di isolamento dell'esosoma
Dopamina cloridrato H8502-10G	Sigma	H8502-10G	Utilizzato nel caricamento della dopamina dell'esosoma
Optima XPN-100 Ultracentrifuga	Beckman Coulter		Utilizzato nella fase di isolamento dell'esosoma
Compressa PBS	Biomatik	43602	Nella preparazione della soluzione PBS
Saponina	Sigma	47036-50G-F	È stato utilizzato aggiungendolo alla soluzione totale nel processo di caricamento della dopamina dell'esosoma.
Cellule staminali mesenchimali gelatinose di Wharton	ATCC