Questo video dimostra l'uso dell'optogenetica per indurre la depressione a lungo termine (LTD) nelle sinapsi del nucleo genicolato mediale all'amigdala laterale (MGN-LA), indebolendo il comportamento di ricerca di narcotici indotto da indizi in un modello di ratto. Il ratto, impiantato chirurgicamente con fibre ottiche e trasdotto viralmente per esprimere canali ionici sensibili alla luce, viene sottoposto a stimolazione optogenetica con impulsi ottici a bassa frequenza, innescando il rilascio di neurotrasmettitori e l'indebolimento sinaptico. Questo processo riduce la trasmissione sinaptica di MGN-LA attraverso l'internalizzazione del recettore dei neurotrasmettitori, interrompendo in ultima analisi l'associazione tra segnali e comportamento di ricerca di farmaci.
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Articolo metodologico
Induzione optogenetica della depressione a lungo termine per sopprimere il comportamento di ricerca di stupefacenti nei ratti
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7 agosto 2025
In questo articolo
Abstract
Protocollo
Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Cateterismo endovenoso per roditori, somministrazione di virus e impianto di fibre ottiche
- Prepara gli animali per l'intervento chirurgico.
- Anestetizzare completamente i ratti con l'anestetico di scelta in base alle linee guida istituzionali. Un'opzione è la ketamina cloridrato (87,5-100 mg/kg, intramuscolare [i.m.]) e la xilazina cloridrato (5 mg/kg, i.m.). Assicurarsi che il ratto sia completamente anestetizzato controllando la mancanza....
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 0.9% Saline | Fisher Scientific | NC0291799 | |
| A.M.P.I. Stimulus Isolator | Iso-Flex | ||
| AAV5.hSyn.oChIEF.tdTomato | Duke Viral Vector Core (via Roger Tsien) | #268 | |
| AAV5.hSyn.tdTomato (Control) | Duke Viral Vector Core Control | ||
| Artificial Tears (unguento oftalmico) | Covetrus | 70349 | |
| Betadine | Butler Schein | 38250 | |
| Cocaine HCl | NIDA Drug Supply Center | 9041-001 | |
| Regolatore di temperatura a doppio canale | Warner Instruments | TC-344C | |
| Etanolo | Università di Pittsburgh Chimica Magazzino | 200C5000 | |
| Puntale Tappi antipolvere | Thor Labs | CAPL | Tappi antipolvere in plastica bianca per puntali da 1,25 mm |
| Manicotti di accoppiamento per ghiere | Lenti doriche | F210-3011 | Sleeve_BR_1.25, bronzo, 1,25 mm ID |
| Puntali | Prodotti in fibra di precisione | MM-FER2007C-2300 | Ghiera in ceramica LC/PC multimodale Ø1,25 mm, foro Ø230 μm |
| Fibra ottica | Thor Labs | FP200URT | fibra multimodale con nucleo da 200 μm (0,5 NA) |
| Giunto rotante in fibra ottica | Prizmatix | (Ordinato da Amazon) | Diametro 18 mm, connettore FC-FC per fibra |
| Strumento di spelatura delle fibre | Thor Labs | T12S21 | |
| Gentamicin | Henry Schein | 6913 | |
| Siringa Hamilton | Hamilton | 80085 | 10 μL volume, 26 gauge, 2 pollici, stile a punta 3 |
| Pistola termica | Allied Electronics | 972-6966 | 250 V, 750-800 °F |
| Prodotti in fibra | epossidica di precisione termopolimerizzabile | PFP-353ND-8OZ | |
| Eparina | Henry Schein | 55737 | |
| Acido cloridrico | Fisher Scientific | ||
| Ketamina HCl | Henry Schein | 55853 | La ketamina è una sostanza controllata e deve essere maneggiata secondo le linee guida istituzionali |
| Schein | 9846 | Lactated Ringer's | |
| Laser, driver e accoppiatore laser-fibra | OEM Laser Systems | BL-473-00100-CWM-SD-xx-LED-0 | Laser a stato solido pompato a diodi da 100 mW, 473 nm (un'opzione) |
| Lidocaine | Butler Schein | 14583 | |
| Sensore di luce | Thor Labs | PM100D | Console compatta per contatore di energia con display digitale |
| Adesivo istantaneo Loctite | Grainger | 5.00E + 207 | |
| Amplificatore per microelettrodi / Acquisizione dati | Dispositivi molecolari | Digidata 1440A | |
| Harvard Apparatus | 70-4501 | a doppia siringa | |
| Sutter Instruments | MPC-200/ROE-200 | ||
| Orthojet cemento dentale, liquido | Lang Dental | 1504BLK | |
| nero Orthojet cemento dentale, polvere | Lang Dental | 1530BLK | Polvere contemporanea, nero |
| Patch Cables | Thor Labs | FP200ERT | Multimode, FT030 Tubi |
| Rimadyl (Carprofen) | Henry Schein | 24751 | |
| Autosomministrazione Camere/Software | Med Associates | MED-NP5L-D1 | |
| Viti a macchina in acciaio inossidabile | WW Grainger | 6GB25 | M2-0.40mm Vite a macchina, Pan, Phillips, A2 Acciaio inossidabile, Liscio, 3 mm di lunghezza |
| Adattatore stereotassico per ghiere | Thor Labs | XCL | |
| Stereotassico Frame | Stoelting | 51603 | |
| Filo di sutura | Fine Science Tools | 18020-50 | Filo di seta; Dimensioni: 5/0, Diametro: 0,12 mm |
| Adesivo tissutale Vetbond | Covetrus | 1505 |
