Induzione di una crisi elettroconvulsivante acuta in un modello di ratto

Abstract

Fonte: Jang, S., et al, Convulsioni elettroconvulsive nei ratti e frazionamento dei loro ippocampi per esaminare i cambiamenti indotti dalle convulsioni nelle proteine della densità postsinaptica. J. Vis. Exp. (2017)

Questo video mostra l'induzione di una crisi elettroconvulsivante acuta (SEC) in un modello di ratto per studiare la neuroplasticità indotta dalle crisi. I ricercatori applicano la stimolazione elettrica tramite elettrodi a clip per l'orecchio, innescando l'ipereccitabilità neuronale e il clono. Questo modello aiuta a studiare la plasticità sinaptica, i meccanismi convulsivi e gli effetti terapeutici correlati alla terapia elettroconvulsivante (ECT).

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Induzione del SEC acuto

NOTA: Vedere la Figura 1B, pannello superiore.

1. Inumidire le clip auricolari con soluzione fisiologica sterile e assicurarsi che siano sature.
2. Inumidisci le orecchie di un ratto con soluzione fisiologica sterile avvolgendole in una garza imbevuta di soluzione salina. Una volta bagnati, togliete la garza.
3. Attacca una clip per orecchio e posizionala oltre la fascia cartilaginea principale.
4. Confermare sulla macchina ECS che è stato stabilito un vero loop; in caso contrario, sulla macchina apparirà un messaggio di errore o una lettura di "1".
5. Indossa un guanto spesso e non metallico. Tenendo delicatamente il ratto con una mano guantata, premere il pulsante "SHOCK" per alcuni secondi e rilasciare lentamente la presa sul ratto per osservare il sequestro. Per il controllo fittizio "senza convulsioni" (NS), maneggiare il ratto in modo identico, ma non erogare la corrente.
6. Scollegare le clip per le orecchie all'inizio del clono e registrare il comportamento convulsivo secondo una scala di Racine rivista che include "movimenti della bocca e del viso" (fase 1), "cenno del capo con la testa" (fase 2), "clono degli arti anteriori" (fase 3), "impennamento con clono degli arti anteriori" (fase 4) e "impennamento e caduta con clono degli arti anteriori" (fase 5). La crisi dovrebbe durare circa 10 s; Registrare la durata della crisi utilizzando un timer.
7. Dopo la fine del sequestro, riportare il ratto nella sua gabbia domestica. Monitora il ratto per altri 5 minuti per assicurarti che il ratto si riprenda dalle convulsioni. Tienilo alloggiato singolarmente nella gabbia e rimetti la gabbia nella sala di risveglio.
8. Ripeti l'induzione del SEC sul ratto successivo.
9. Monitorare i ratti per tutto il resto della giornata e almeno una volta al mattino e una volta nel pomeriggio il giorno successivo fino a quando non vengono soppressi per gli esperimenti.
   NOTA: Il metodo di induzione del SEC potrebbe portare a segni clinici come effetto collaterale incidentale, che richiede attenzione. Ad esempio, il protocollo di induzione del SEC potrebbe indurre convulsioni che durano più di 15 secondi e causare inutile angoscia ai ratti. In questo caso, terminare la crisi utilizzando diazepam (10 mg/kg, i.p.) o pentobarbital (25 - 30 mg/kg, i.p.). Se i ratti sviluppano distress respiratorio o gravi anomalie comportamentali dopo la cessazione delle crisi, sopprimerli mediante inalazione di anidride carbonica seguita da decapitazione.

Risultati

Figura 1: Schema per l'induzione di ECS acuto e cronico. (A) Un ratto è stato collegato a un generatore di impulsi tramite elettrodi a clip per l'orecchio ed è stata applicata una scossa elettrica (55 mA, 100 impulsi/s pe...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Sprague-Dawley rat	Charles River Laboratories		ECS fornisce
un generatore di impulsi	Ugo Bsile, Comerio, Italia	57800	ECS supplies