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Sviluppo di una rete neurale micro-tessutale utilizzando una micro-colonna basata su idrogel

August 7th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Struzyna, L. A. et. al., Reti neurali ingegnerizzate tridimensionali di microtessuti anatomicamente ispirate per la ricostruzione, la modulazione e la modellazione del sistema nervoso. J. Vis. Exp. (2017)

Questo video mostra lo sviluppo di reti neurali micro-tessili utilizzando una micro-colonna in idrogel con un nucleo a matrice extracellulare. Gli aggregati neuronali seminati aderiscono, estendono le proiezioni e formano reti neurali strutturate, contribuendo ai progressi nello sviluppo neurologico e nella ricerca neuroterapeutica.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Sviluppo dell'idrogel di agarosio (componente acellulare delle reti neurali ingegnerizzate con micro-tessuti (micro-TENN))

  1. Preparazione della soluzione di agarosio
    1. All'interno di una cabina di biosicurezza, preparare i serbatoi per le microcolonne trasferendo 20 ml di soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco (DPBS) a ciascuna delle due piastre di Petri da 10 cm. Sterilizza pinze fini e microbisturi con uno sterilizzatore a perli....

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
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Figura 1: Progetti del dispositivo di fabbricazione di micro-colonne tagliate al laser e dello stampo piramidale a micro-pozzetto stampato in 3D per l'aggregazione cellulare. (A)-(B) Progetto e immagine delle metà inferiore e superiore dell'array di ca.......

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Laser cutterSistemi laser universaliPLS4.75Utilizzato per fabbricare lo stampo a microcanali tagliato al laser.
Dispositivo di fabbricazione di microcolonne tagliate al laserSu misura--------------Contatta il nostro gruppo di ricerca se interessato. Dimensioni e progetti forniti nel manoscritto.
Viti----------------------------#4-40 con un diametro della filettatura di 3,05 mm
Dadi----------------------------#4-40 con un diametro della filettatura di 3,05 mm
Ago per agopuntura (diametro 180 μm)Lhasa medicalsj.16X40Il diametro può essere variato in base alla dimensione desiderata per il lume della microcolonna.
Piastra di PetriFisher08772B
Soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco (DPBS)Tubetta14200075 in
AgarosioSigmaA9539-50G
Tubo capillare (diametro 398 μm)Fisher21170DIl diametro può essere variato in base alla dimensione desiderata per il guscio della microcolonna.
Piastra riscaldanteFisherSP88857200
Barra magneticaFisher1451352
MicropipettaSigmaZ683884-1EA
Ago calibro 25 mmFisher14-826-49
MicrobisturiRoboz chirurgicoRS-6270
ForbiciStrumenti per la scienzafine14081-09
PinzeStrumenti di precisione mondiali501985
Sterilizzatore a perline caldeSigmaZ378550-1EA
StereoscopioNikonSMZ800NUtilizzato per tutte le fasi di dissezione e per la fabbricazione di micro-TENN.
Coda di ratto di tipo I collageneCorning354236Mantenere a 4 ºC e rimuovere solo quando necessario. Usa il ghiaccio per preservarne la temperatura quando è in uso.
Provetta per microcentrifugaFisher02-681-256
Lamina di topoCorning354232Mantenere a 4 ºC e rimuovere solo quando necessario. Usa il ghiaccio per preservarne la temperatura quando è in uso.
Terreno neurobasaleInvitrogen21103049Terreno basale per la coltura di cellule neuronali prenatali ed embrionali. Conservare a 4ºC e scaldare a 37 ºC prima dell'uso.
Idrossido di sodio (NaOH)FisherSS2661
Acido cloridrico (HCl)FisherSA48-1
Cartina di tornasoleFisher09-876-18
Soluzione salina bilanciata di Hank (HBSS)Invitrogen14170112Conservare a 4 ºC.
0,25% Tripsina-EDTAInvitrogen25200056Conservare a -20 ºC e riscaldare a 37 ºC prima dell'uso.
Desossiribonucleasi pancreatica bovina (DNasi) ISigma10104159001conservare a -20 ºC e riscaldare a 37 ºC prima dell'uso.
B-27 IntegratoreInvitrogen12587010Integratore aggiunto al terreno neurobasale per la coltura di neuroni ippocampali e corticali. Conservare a -20 ºC e caldo a 37 ºC prima dell'uso.
L-glutamminaInvitrogen35050061conservare a -20 ºC e riscaldare a 37 ºC prima dell'uso.
Sprague Dawley embrionale giorno 18 rattiCharles RiverCeppo 001
Pipetta PasteurFisher22-042816
Provetta da centrifuga da 15 mlEMESCO1194-352099
VortexFisher02-215-414
CentrifugaFisher05-413-115
EmocitometroFisher02-671-6
Objet30 Stampante 3DStratasys--------------Utilizzato per fabbricare gli stampi piramidali a micro-pozzetti.
Stampo piramidale per pozzi stampato in 3DSu misura--------------Contatta il nostro gruppo di ricerca se interessato. Dimensioni e progetti forniti nel manoscritto.
Polidimetilsilossano (PDMS) e agente indurenteFisherNC9285739Viene fornito in kit con elastomero e agente indurente. Utilizzare all'interno di una cappa chimica.
ImbutoFisher10-348C
Pipetta da 1 ml BulboSigmaZ509035
Micro-spatolaFisherS50821
Piastra di coltura a 12 pozzettiEMESCO1194-353043
FornoFisher11-475-154
IncubatriceFisher13 998 076
Microscopio Eclipse Ti-SNikon--------------Utilizzato per scattare le immagini a contrasto di fase. Con acquisizione di immagini digitali tramite fotocamera QiClick interfacciata con il software di ricerca di base Nikon elements (4.10.01).
sierologica monouso polistirene Invitrogen 13-678-11D

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