La radioterapia combinata in un modello di tumore ortotopico cervello di topo

Sommario

Lo scopo di questo articolo è quello di descrivere l'utilizzo di un modello di glioblastoma ortotopico per gli studi di chemio-radioterapia. Questo articolo passare attraverso l'elaborazione delle cellule, l'impianto, e la radioterapia del mouse utilizzando un modello intracranica.

Abstract

Glioblastoma multiforme (GBM) sono le più comuni e aggressivi tumori cerebrali primari adulti ^1. Negli ultimi anni sono stati compiuti progressi sostanziali nella comprensione dei meccanismi di invasione tumorale, e diretta inoculazione intracerebrale del tumore offre l'opportunità di osservare il processo invasivo in un ambiente fisiologicamente appropriato ^2. Per quanto riguarda i tumori del cervello umano sono interessati, i modelli ortotopici attualmente disponibili sono stabiliti mediante iniezione stereotassica di sospensioni cellulari o impianto di un pezzo solido di tumore mediante una procedura complicata craniotomia ^3. Nella nostra tecnica si raccogliere cellule da coltura tissutale per creare una sospensione di cellule utilizzata per impiantare direttamente nel cervello. La durata dell'intervento è di circa 30 minuti, e come il mouse deve essere in un piano costante chirurgico, un anestetico iniettabile viene utilizzato. Il mouse viene posizionato in un telaio stereotassico fatta da Stoetling (figura 1). A poppaer la zona chirurgica viene pulito e preparato, si pratica un'incisione, e il bregma si trova per determinare la posizione del craniotomia. La posizione del craniotomia è di 2 mm verso destra e 1 mm anteriore del bregma. La profondità di 3 mm dalla superficie del cranio, e le cellule vengono iniettate ad una velocità di 2 microlitri ogni 2 minuti. La pelle viene suturata con 5-0 PDS, e il mouse è autorizzato a svegliarsi su una piastra elettrica. Dalla nostra esperienza, a seconda della linea cellulare, il trattamento può avvenire da 7-10 giorni dopo l'intervento. Somministrazione di farmaci dipende dalla composizione di farmaco. Per la radioterapia i topi vengono anestetizzati, e metterlo in una maschera su misura. Piombo copre il corpo del topo e espone solo il cervello del mouse. Lo studio della tumorigenesi e la valutazione di nuove terapie per GBM richiedono accurati e riproducibili cerebrali modelli animali tumorali. Così usare questo modello ortotopico cervello per studiare l'interazione del microambiente del cervello e il tumore, per testare il EFFICACIAess di diversi agenti terapeutici con e senza radiazioni.

Protocollo

I. Preparazione cellulare

1. Le cellule vengono coltivate a confluenza in DMEM con 10% FBS circa un 80% confluenti 225 centimetri pallone da ³ per ogni 5 topi per essere impiantate.
2. Aspirare mezzi fuori delle cellule, lavare con 10 ml di PBS senza calcio o magnesio. Aspirato PBS le cellule.
3. Tripsinizzare le cellule con 3 ml di tripsina, attendere 10-15 min, e neutralizzare la tripsina con 15 ml di mezzo.
4. Pipettare tutte le cellule ei media in una ml 50 conica. Due flaconi grandi inserirsi in uno da 50 ml.
5. Spin celle a 1600 rpm per 7 minuti a 4 ° C. Completamente Aspirare il surnatante. Risospendere le cellule....

Discussione

Gliomi maligni, quali glioblastoma multiforme, rappresentano i più comuni tumori cerebrali primari e hanno una prognosi infausta ^4. La sopravvivenza dei pazienti affetti da GBM è rimasto praticamente invariato negli ultimi dieci anni (cioè, 9-12 mesi post-diagnosi), nonostante i progressi nella chirurgia, radioterapia e chemioterapia ^5. Le caratteristiche di un modello appropriato per lo studio del trattamento glioma dovrebbe includere una posizione riproducibile tumore e la crescita delle cellule .......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Lab standard stereotassico Instrutment	Stoelting mouse e adattatore Rat
Betadine	100% EtOH
70% EtOH	50% Acetone
6 "Q-tips	Tamponi imbevuti di alcol
Hamilton siringa 80008	Ethicon 5-0 PD
1701 SN 31-33G / 1 "/ PT3 ago	1 ml siringhe
Aghi 25G	Riscaldamento pad
Artificial Tears Pomata	Molto raffinato marcatore permanente a punta