Murine superficiale Lymph Chirurgia Node

Summary

Per seguire la progressione di una risposta immunitaria nel tempo all'interno del mouse stesso, linfonodi può essere sequenzialmente asportato chirurgicamente. Qui, si descrive come questa tecnica può essere eseguita.

Abstract

Nel campo della immunologia, per comprendere la progressione di una risposta immunitaria contro un vaccino, un'infezione o un tumore, la risposta viene spesso seguita nel tempo. Analogamente, lo studio dell'omeostasi linfocitaria esperimenti corso richiede tempo. Eseguire questi studi all'interno del mouse stesso è ideale per ridurre la variabilità sperimentale così come il numero di topi utilizzati. Il prelievo di sangue permette di effettuare esperimenti nel tempo, ma dà solo informazioni su linfociti circolanti e fornisce un numero limitato di celle ^1-4. Dal linfociti circolanti attraverso il corpo e residente nei linfonodi hanno proprietà diverse, è importante esaminare entrambe le posizioni. La rimozione sequenziale dei linfonodi da un intervento chirurgico offre una opportunità unica di seguire una risposta immunitaria o l'espansione delle cellule immunitarie nel topo lo stesso nel tempo. Inoltre, questa tecnica si ottiene tra 1-2x10 ⁶ cellule per linfonodo che è sufficiente a aerform caratterizzazione fenotipica e / o saggi funzionali. Sequential chirurgia linfonodo o linfoadenectomia è stato usato con successo da noi e altri ^5-11. Qui, si descrive come i linfonodi inguinali brachiale e possono essere rimossi da una piccola incisione nella pelle di un mouse anestetizzati. Dal momento che l'intervento è superficiale e fatto rapidamente il mouse recupera molto velocemente, guarisce bene e non provare dolore eccessivo. Ogni secondo giorno, è possibile raccogliere uno o due linfonodi consentendo esperimenti andamento nel tempo. Questa tecnica è quindi adatto ad studiare le caratteristiche di linfonodi risiedono linfociti nel tempo. Questo approccio è adatto a vari disegni sperimentali e crediamo che molti laboratori trarrebbero beneficio da eseguire in sequenza operazioni linfonodali.

Protocol

1. Preparazione prima della chirurgia

I topi sono stati trattati in conformità al Consiglio canadese sugli orientamenti cura degli animali.

1. Anestetizzare topi mediante iniezione di ketamina / xilazina (150/300 mg / kg, ip) o per inalazione di isoflurano (2%, ossigeno 1L). Se disponibile, isoflurano deve essere usato in quanto consente un migliore controllo del tempo anestesia e profondità. Inoltre, l'ossigeno viene somministrato al tempo stesso che sostiene le funzioni fisiologiche dell'animale. Inoltre, isoflurano è direttamente eliminato dai polmoni e quindi non richiede il metabolismo epatico o renale.
2. Iniettare bu....

Discussion

Abbiamo descritto un protocollo di chirurgia LN, che può essere applicato a molti sistemi sperimentali. Anche se molto utile per seguire le risposte immunitarie o omeostasi delle cellule immunitarie, questa tecnica ha alcune limitazioni. In primo luogo, solo quattro LNs può essere raccolto. In secondo luogo, la risposta immunitaria studiare deve essere sistemica o si verificano nelle superficiali inguinali o brachiale (pelle-drenante) LNS. Infine, il numero di cellule raccolte è influenzata dalla qualità della rimozione.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagente Nome	Azienda	Numero di catalogo	Comments
Graefe Belle Pinze Premium pattern	Harvard Apparatus	52-2144	Fortemente curvo, 10 cm (4 in), punta 0,8 millimetri
Clip Michel Applicazione e rimozione Pinze	Harvard Apparatus	52-3779	12,5 cm (5 pollici)
Michel clip 100	Harvard Apparatus	52-3746	7,5-1,75 millimetri
Temgesic (buprenorfina cloridrato)	Schering-Plough
Vetalar (cloridrato di ketamina)	Boniche Animal Healthcare		DIN: 01989529
Rompun (xilazina)	Bayer		DIN: 02169592
Isoflurano	ABBOTT		DIN: 02032384
Hypotears con pomate oftalmiche	Novartis Ophtalmics		DIN: 02133288
Baxedin (Clorhexidine gluconato 2% in alcool isopropilico al 70%)	Omega	L0000017	DIN: 02251477