In questo video articolo si descrive l'uso di una nuova Ex vivo di infezione acuta da herpes simplex virus di tipo I infezione corneale epiteliale.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Ex Vivo Modello organotipiche corneale di acuta epiteliali Herpes simplex virus di tipo I Infezione
In questo articolo
Sommario
Abstract
Cheratite da herpes è una delle patologie più gravi associati al virus herpes simplex di tipo 1 (HSV-1). Cheratite Herpes è attualmente la principale causa di cecità sia cornea-derivata e associata ad infezione nel mondo sviluppato. Presentazione tipica di cheratite da herpes include infezione dell'epitelio corneale e talvolta più profonda stroma corneale e endotelio, portando a tali patologie corneali permanenti come cicatrici, assottigliamento e opacità 1.
Corneale HSV-1 infezione è tradizionalmente studiato in due tipi di modelli sperimentali. Il modello in vitro, in cui vengono coltivate infettato monostrati di cellule epiteliali corneali in una capsula di Petri, offre semplicità, elevato livello di replicabilità, esperimenti veloci e costi relativamente bassi. D'altra parte, il modello in vivo, in cui vengono inoculati animali come conigli o topi direttamente nella cornea, offre una fisiologica altamente sofisticatosistema, ma ha costi più elevati, più lunghi esperimenti, per la cura degli animali necessari, e un maggior grado di variabilità.
In questo articolo video, forniamo una dimostrazione dettagliata di un nuovo modello ex vivo di corneale HSV-1, che unisce i punti di forza sia in vitro e in vivo. Il modello ex vivo utilizza cornee intatte organotypically mantenute in coltura e infettati con HSV-1. L'uso del modello ex vivo permette conclusioni altamente fisiologicamente basati, tuttavia è piuttosto costoso e richiede impegno di tempo paragonabile a quella del modello in vitro.
Protocollo
Tutti i reagenti sono stati acquistati ed attrezzature sterili o sono stati sterilizzati prima della procedura. In questo articolo viene descritta la procedura di impostazione del modello ex vivo inizia con un pre-enucleato occhi. Nei nostri esperimenti, usiamo freschi bulbi oculari interi da giovani (8-12 settimane) conigli albini (Pel-Freez Biologicals, Rogers, AR). Inoltre, utilizziamo cornee umane ottenute dalla banca degli occhi locale. Se si esegue l'enucleazione te stesso, fare attenzione a non danneggiare la cornea o il limbo nel corso della procedura. Protocolli di enucleazione Coniglio può essere trovato altrove 2.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
In questo video articolo si descrive un metodo per lo studio acuta corneale HSV-1 in un modello ex vivo. Questo modello è un passo utile tra la in vitro e in vivo, perché permette di convalida fisiologicamente accurata dei risultati di coltura cellulare e, quindi, limita la quantità di sperimentazione animale che deve essere eseguita. Inoltre, il modello ex vivo offre un'opportunità unica e preziosa per lo studio epiteliale infezione da herpes in intatti cornee umane. Rip.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Il sostegno della Banca degli Occhi Lions del Delaware Valley era preziosa per questo lavoro. Anticorpo di topo primario monoclonale contro ICP8 era un gentile dono del Dr. David Knipe (Harvard Medical School). Ringraziamo anche il dottor Stephen Jennings (Drexel University College of Medicine) e il Dr. Peter Laibson (Wills Eye Institute) per le discussioni utili e competenze.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Reagenti / Materiali di consumo | Azienda | Catalogo # | |
| Medium minimo (MEM) | Mediatech | 10-010-CV | |
| Aminoacidi non essenziali (soluzione 100x) | Mediatech | 25-025-CI | |
| L-Glutammina | Mediatech | 25-005-CI | |
| Penicillina G sale di sodio | Sigma | P3032 | |
| Streptomicina solfato di sale | Sigma | S9137 | |
| Agarosio | Invitrogen | 15510-027 | |
| Soluzione tampone fosfato (PBS) | Preparato in laboratorio | N / A | |
| Tripsina EDTA (1x) | Mediatech | 25-053-CI | |
| Sangue DNeasy e kit di tessuti | QIAGEN | 69504 | |
| RNeasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 | |
| Laemmli buffer | Preparato in laboratorio | N / A | |
| Temperatura ottimale di taglio (OCT) Composto | Tissue-Tek | 4583 | |
| Occhi coniglio intero (Young) | Pel-Freez | 41211-2 | |
| Le cornee umane e Occhi Whole | Eye Banca Locale | N / A | |
| 12 Beh porcellana Piastra Spot | Lab di Avogadro di alimentazione | 1877 | |
| 35 millimetri tessuto piatto Cultura | Falco | 353001 | |
| 6 BeneColture Cellulari Piastra | Greiner Bio-One | 657160 | |
| Cryomold Intermedio | Tissue-Tek | 4566 |
Riferimenti
- Kaye, S., Choudhary, A. Herpes simplex keratitis. Prog. Retin. Eye Res. 25, 355-380 (2006).
- Holmberg, B. J. Enucleation of exotic pets. Journal of Exotic Pet Medicine. 16, 88-94 (2007).
- Remeijer, L., Osterhaus, A., Verjans, G.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
