Caratterizzazione elettrofisiologica delle risposte neuronali è importante per comprendere le funzioni cerebrali e per guidare il posizionamento dei coloranti per via tracing. Tuttavia, molti studi sono effettuati in animali anestetizzati. Per capire la funzione del cervello senza anestesia, abbiamo sviluppato un metodo per registrare le proprietà di risposta dei neuroni e iniettare coloranti nel topo sveglio.
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Articolo metodologico
Preparazione di un mouse Awake per la registrazione di risposte neurali e iniezione Tracers
In questo articolo
Sommario
Abstract
È ben noto che l'anestesia altera proprietà di risposta neurali in diverse regioni del cervello. 13. Nel sistema uditivo, le proprietà fondamentali di risposta dei neuroni del tronco encefalico compresa una soglia, la specificità frequenza e bande laterali inibitorie sono alterate in modo significativo sotto anestesia 1-2. Queste osservazioni richiesto fisiologi a cercare modi per registrare da singoli neuroni senza gli effetti contaminanti di anestesia. Un risultato era una preparazione decerebrate, dove il tronco è stato completamente recisi a livello del mesencefalo 4. Gli svantaggi di questa preparazione sono un formidabile intervento chirurgico, l'eliminazione di scendere proiezioni del prosencefalo, e l'incapacità di utilizzare la stimolazione sensoriale per esaminare le strutture al di sopra del mesencefalo. Una strategia diversa è stata quella di impiantare cronicamente schiere di elettrodi per registrare da singoli neuroni e cluster multipla mentre l'animale è sveglio e / o si comporta 5,6 7-9 al mouse 10-12. Utilizzando questo metodo, siamo in grado di effettuare registrazioni elettrofisiologiche per diversi giorni nel topo non anestetizzato. Al termine delle sessioni di registrazione, si può iniettare un colorante per ricostruire posizioni elettrodi e siti di registrazione o iniettare un tracciante in modo che i percorsi da e verso i loci di registrazione può essere determinato. Questo metodo permette di ben isolate registrazioni singolo neurone per più giorni, senza l'uso degli anestetici.
Protocollo
1. Poggiatesta Panoramica
- Per assemblare una custom-built testa-post, inserire un 1/16 "in acciaio inox roll-pin perpendicolarmente in un foro praticato in un 3/32" tondino di acciaio inox in modo da formare una croce. Il pezzo verticale della testa post dovrebbe essere circa 20 mm e il pezzo trasversale orizzontale di circa 15 mm. Toccare un'estremità dello stelo verticale ad accettare un # 1-72 vite. (Fig. 1).
- Durante l'intervento chirurgico e la registrazione, il capo-post è fissato in un custom-built in ottone o barra di alluminio di montaggio con un # 1-72 vite
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Discussione
Il vantaggio del capo-post sistema di ritenuta per esperimenti elettrofisiologici e neuroanatomici in mouse è che gli esperimenti possono essere condotti con sveglio non anestetizzati, topi, eliminando una potenziale contaminazione risposta dovuta ai farmaci anestetici. Inoltre, l'allestimento può essere utilizzato per più giorni per consentire l'uso animale più efficiente.
La maggior parte dei componenti per la testa-post sono disponibili off-the-shelf. Soltanto il capo-post ed appa.......
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Dichiarazioni
Non abbiamo nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Supportato da NSF concessione 0920060, NIH concessione DC004395, NHMRC concessione 1009482, NSW Office of Science and Medical Research, e il Passe Garnett e Rodney Williams Memorial Foundation.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Comments |
| Etch gel per la pulizia cranio prima cemento dentale | Henry Schein | 101-5396 | 12/pk con 1.2 ml siringhe |
| Primer per cemento dentale | Kerr OptiBond | 25881 | 8 mL bottiglia |
| Adesivo per cemento dentale | Kerr OptiBond | 25882 | 8 mL bottiglia |
| Applicatori di cemento dentale | Kerr OptiBond | 24680 | 200/pk |
| Dental Cement | Charisma, Heraeus Kulzer | 66000085 | Siringa Refill 4GM |
| Tungsten Rod (Pin terra) | Sistemi AM | 717200 | 0.010 "di diametro |
| Economia leggera polimerizzazione UV | Henry Schein | CU-80 | |
| Testa-post | Costruito in-house | ||
| Barra di montaggio | Costruito in-house | ||
| Blocco di montaggio | Costruito in-house | ||
| Frame stereotassico | David Kopf Instruments | 902 | |
| Mouse e adattatore Rat neonatale | Stoelting | 51625 | |
| DeltaPhase Pad isotermico | Braintree Scientific, Inc. | 39DP |
Riferimenti
- Evans, E. F., Nelson, P. G. The responses of single neurones in the cochlear nucleus of the cat as a function of their location and the anaesthetic state. Exp. Brain Res. 17, 402-427 (1973).
- Joris, P. X.
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Ristampe e permessi
