Si descrivono procedure di preparazione e registrazione elettrofisiologica da fette di cervello che mantengono il dorso-ventrale asse mediale corteccia entorinale (MEC). A causa di codifica neurale della posizione segue un dorso-ventrale organizzazione all'interno della MEC, queste procedure di facilitare studio dei meccanismi cellulari importanti per la navigazione e la memoria.
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Articolo metodologico
Preparazione di sezioni parasagittali delle inchieste sui dorso-ventrale organizzazione della corteccia entorinale Rodent mediale
In questo articolo
Sommario
Abstract
Calcolo nel cervello si basa su neuroni che rispondono in modo appropriato ai rispettivi ingressi sinaptici. I neuroni si differenziano per il loro complemento e distribuzione di canali ionici della membrana che determinano il modo in cui rispondono agli ingressi sinaptici. Tuttavia, il rapporto tra queste proprietà cellulari e la funzione neuronale in comportamenti animali non è ben compreso. Un approccio a questo problema è di investigare topograficamente organizzati circuiti neurali in cui la posizione dei singoli neuroni mappe su informazioni che codificano o calcoli essi effettuati 1. Gli esperimenti che utilizzano questo approccio suggeriscono i principi per l'ottimizzazione della risposta sinaptica alla base codifica dell'informazione nei circuiti sensoriali e cognitive 2,3.
L'organizzazione topografica delle rappresentazioni spaziali lungo l'asse dorso-ventrale della corteccia entorinale mediale (MEC) fornisce l'opportunità di stabilire relazioni tra i meccanismi cellulari e calcoli importante per la cognizione spaziale. I neuroni nello strato II del MEC roditore posizione utilizzando la codifica di tipo grid cottura campi 4-6. Per neuroni trovati in posizioni dorsali in MEC la distanza tra i singoli campi di cottura che formano una griglia è dell'ordine di 30 cm, mentre per i neuroni in posizioni progressivamente più ventrali questa distanza aumenta a maggiore di 1 m. Diversi studi hanno rivelato proprietà cellulari di neuroni strato II del MEC che, come la spaziatura tra i campi della griglia di cottura, anche differire a seconda delle dorso-ventrale posizione, suggerendo che queste proprietà cellulari sono importanti per il calcolo spaziale 2,7-10.
Qui si descrivono le modalità di preparazione e registrazione elettrofisiologica di fettine di cervello che mantengono la dorsale-ventrale l'ampiezza delle investigazioni MEC consente l'organizzazione topografica delle proprietà biofisiche e anatomiche dei neuroni MEC. Il dorso-ventrale posizione di n identificatoeurons relativi punti di riferimento anatomici è difficile stabilire con precisione con protocolli che utilizzano fette orizzontali di MEC 7,8,11,12, poiché è difficile stabilire punti di riferimento per l'esatto dorso-ventrale posizione della fetta. Le procedure che descrivono consentono la misurazione accurata e coerente di localizzazione delle cellule registrate lungo l'asse dorso-ventrale del MEC, nonché la visualizzazione dei gradienti molecolari 2,10. Le procedure sono state sviluppate per l'utilizzo con topi adulti (> 28 giorni) e sono stati impiegati con successo con i topi fino a 1,5 anni. Con aggiustamenti potrebbero essere utilizzati con più giovani topi o altre specie di roditori. Un sistema standardizzato di preparazione e misura aiuterà un'indagine sistematica delle proprietà cellulari e microcircuito di questa zona.
Protocollo
1. Slice Preparazione parasagittale
1,1 Dissect out emisferi cerebrali
Tutti sperimentazione animale dovrebbero seguire locali esame etico e delle normative nazionali. Nel caso degli esperimenti descritti qui, il lavoro conforme agli animali Regno Unito (Scientific Procedures) Act 1986. Noi abitualmente uso dislocazione cervicale senza anestesia per eutanasia il mouse prima di rimuovere il cervello. In alternativa, il mouse può essere terminale anestetizzati, ma in questo caso può essere necessario per determinare se la scelta di anestetico influenza proprietà neuronali.
Togliere il cer....
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Discussione
Per facilitare studio di proprietà del circuito MEC che seguono un dorso-ventrale organizzazione che abbiamo descritto in dettaglio una procedura per la produzione di una preparazione parasagittale sezione che conserva il dorso-ventrale entità del MEC.
Passaggi critici
Rimozione del cervello dell'animale. Prestare particolare attenzione per evitare di esercitare pressione sul cervello. Questo è più importante rapida rimozione del cervello.
<.......Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Niente da rivelare.
Ringraziamenti
Siamo ringraziare per il loro sostegno: Commonwealth Scholarship Commissione UK finanziamento (HP), EPSRC (HP), BBSRC (NPF) e dell'Unione europea Azioni Marie Curie (NPF).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | ||
|---|---|---|---|---|---|
| Taglio ACSF (mM) | ACSF standard (mM) | Soluzione interna (mm) | CASNumber | Fornitore Numero di catalogo | |
| NaCl | 86 | 124 | 7647-14-5 | Sigma S9888 | |
| NaH 2 PO 4 | 1,2 | 1,2 | 13472-35-0 | Sigma 71505 | |
| KCl | 2,5 | 2,5 | 10 | 7447-40-7 | Sigma P3911 |
| NaHCO 3 | 25 | 25 | 144-55-8 | Fischer S/4240 | |
| Glucosio | 25 | 20 | 50-99-7 | Sigma G5767 | |
| Saccarosio | 75 | 57-50-1 | Sigma S5016 | ||
| CaCl 2 | 0,5 | 2 | 10043-52-4 | VWR 190464K | |
| MgCl 2 | 7 | 1 | 2 | 7786-30-3 | Sigma 63020 |
| K Gluconato | 130 | 299-27-4 | Sigma G4500 | ||
| HEPES | 10 | 7365-45-9 | Sigma H3375 | ||
| EGTA | 0,1 | 67-42-5 | Sigma E4378 | ||
| Na 2 ATP | 2 | 34369-07-8 | Sigma A7699 | ||
| Na 2 GTP | 0,3 | 36051-31-7 | Sigma G8877 | ||
| NaPhospho-Creatina | 10 | 19333-65-4 | Sigma P7936 | ||
| Biocitina (opzionale) | 2,7 | 576-19-2 | Sigma B4261 |
Tabella 1. Taglio ACSF, standard ACSF e K-gluconato ricette soluzione interna.
Riferimenti
- O'Donnell, C., Nolan, M. F. Tuning of synaptic responses: an organizing principle for optimization of neural circuits. Trends Neurosci. 34, 51-60 (2011).
- Garden, D. L. F., Dodson, P. D., O'Donnell, C., White, M. D., Nolan, M. F.
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Ristampe e permessi
