Con ovuli<em&gt; Schistosoma mansoni</em&gt; Come<em&gt; In vivo</em&gt; Modello di elminti-indotta infiammazione polmonare

Sommario

Schistosoma mansoni uova sono potenti stimolatori del T helper di tipo 2 (Th2) risposta immunitaria, caratteristica di infezioni parassitarie, asma e infiammazione allergica. Questo protocollo utilizza S. mansoni uovo iniezione per generare un CD4 Th2 citochine indotta da risposta infiammatoria nel polmone, caratterizzata dalla formazione di granulomi intorno al polmone l'uovo, eosinofilia e l'attivazione dei macrofagi alternative.

Abstract

Parassiti Schistosoma sono trematodi del sangue che infettano circa 200 milioni di persone in tutto il mondo ^1. In infezione cronica con Schistosoma, la patologia grave, inclusa la fibrosi epatica e splenomegalia, è causata dalla risposta immunitaria alle uova di parassiti piuttosto che il parassita stesso ^2. Uova Parasite indurre una risposta Th2 caratterizzata dalla produzione di IL-4, IL-5 e IL-13, l'attivazione dei macrofagi alternativa e il reclutamento di eosinofili. Qui, descriviamo l'iniezione di uova di Schistosoma mansoni come un modello per esaminare parassita risposte specifiche citochine Th2 nei polmoni e dei linfonodi drenanti, la formazione di granulomi polmonari che circondano l'uovo e l'infiammazione delle vie aeree.

Dopo sensibilizzazione intraperitoneale e sfida endovenosa, S. mansoni uova vengono trasportati al polmone attraverso le arterie polmonari in cui sono intrappolati all'interno del parenchima polmonareda granulomi composti da linfociti, eosinofili e macrofagi attivati ​​alternativamente ^3-6. Associata alla formazione di granulomi, infiammazione nelle bronco-alveolari spazi, l'espansione dei linfonodi drenanti e l'attivazione delle cellule T CD4 si può osservare. Qui dettaglio il protocollo per isolare le uova Schistosoma mansoni da fegati infettati (modificato da ^7), la sensibilizzazione e sfidando i topi, e il recupero degli organi (lavaggio bronco-alveolare (BAL), del polmone e linfonodi drenanti) per l'analisi. Abbiamo anche istologico dati rappresentativi e immunologici e suggerimenti per l'analisi immunologica aggiuntivo.

In generale, questo metodo fornisce un modello in vivo per indagare elminti indotte risposte immunologiche nel polmone, che è ampiamente applicabile allo studio di Th2 malattie infiammatorie comprese le infezioni elminti, malattie fibrotiche, infiammazione allergica e asma. I vantaggi di questo modello per lo studio del tip2 e infiammazione nel polmone includono la riproducibilità di una potente risposta infiammatoria Th2 nei polmoni e linfonodi drenanti, la facilità di valutazione di infiammazione mediante esame istologico dei granulomi circondano l'uovo, e il potenziale di conservazione a lungo termine del parassita uova.

Protocollo

1. Purificante Schistosoma mansoni Eggs

1. Infect svizzero-Webster topi con cercariae schistosoma, che è lo stadio infettivo del ciclo di vita Schistosoma ^8. In alternativa, ottenere schistosoma topi infettati dal Resource Center NIAID schistosomiasi ( http://www.schisto-resource.org/~~V ). Lasciare topi di 6-7 settimane dopo l'infezione, per cui il tempo-punto, le uova sono presenti nel fegato e può essere recuperato come descritto di seguito (vedi Fig. 1).
2. Euthanize topi con CO _2, e bagnare con il 70% di etanolo. Posizionare ....

Discussione

Qui, un modello che impiega le uova Schistosoma mansoni di indurre l'infiammazione polmonare di tipo 2 viene descritto. Tratti caratteristici di questo modello includono il potente risposta immunitaria Th2, infiammazione delle vie aeree e la formazione di granuloma polmonare. Dal momento che questi parametri dipendono le risposte delle cellule CD4 Th2 ^11, questo è un modello utile per studiare gli effetti delle cancellazioni proteine ​​specifiche o lineage-specifica sulle risposte delle cellule T.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Reagente	Dimensione / Descrizione	Azienda	Catalogo #
Collagenasi / dispasi	500 mg	Roche Applied Science	11 097 113 001
Diff Quik Hema 3 Stain	Imballare	Fisher Scientific Co. LLC	122-911
DMEM	Liquido	Gibco	11965
Falcon 50mL	Imballare	Falco	352070
Intramedic PE Tubi	0,58 millimetri	Becton Dickinson and Co.	427410
Isoflurano	250 mL	Abate Animal Health	52600405
Ketamina	100 mg / mL	Fort Dodge, la salute degli animali	N / A
Recettore anticorpo mannosio	Biotina	ABD Serotec	MCA2235B
Metallic Filtro	Cucina filtro standard	Obiettivo	Laurentiis
Paraformaldeide	16%	Electron Microsc. Scienze	15710
Penicillina / streptomicina	100x	Gibco	15070
Percoll	1 litro	GE Healthcare Biosciences	17 01 0891
Anticorpi RELMα	50 ug	Peprotech	500-P214
Filo chirurgico	2,0 USP 100 yds	Surgical Specialties Corp.	SP118
Siringa con ago	23G, 3/4 di pollice	BD Vacutainer Lab. Med.	305143
USA Standard Testing Sieve	150 pm, 0.0059 "	WS Tyler, Inc.	ASTME-11, Spec. No. 100
Xilazina	20 mg / mL	Maggiordomo	N / A