I filtri di lana di vetro sono stati utilizzati per concentrare i virus acquosa da un certo numero di gruppi di ricerca in tutto il mondo. Qui mostriamo un metodo semplice per la costruzione di filtri di lana di vetro e di dimostrare i filtri sono anche efficaci in concentrazione acquosa virali e patogeni batterici e protozoi.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Filtri di lana di vetro per la raccolta virus a base acquosa e agricole agenti patogeni zoonotici
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il primo passo fondamentale per la valutazione dei livelli di agenti patogeni in sospetto di acqua contaminata è la concentrazione. Metodi di concentrazione tendono a essere specifica per un gruppo particolare agente patogeno, per esempio gli Stati Uniti Metodo Environmental Protection Agency 1623 per Giardia e Cryptosporidium 1, il che significa che più metodi sono necessari se il programma di campionamento di mira più di un gruppo patogeno. Un altro svantaggio dei metodi attuali è l'apparecchiatura può essere complicato e costoso, per esempio il metodo VIRADEL con cartuccia filtrante per concentrare il virus 1MDS 2. In questo articolo abbiamo descritto come creare filtri in lana di vetro per concentrare gli agenti patogeni a base acquosa. Dopo eluizione filtro, il concentrato è suscettibile ad una fase di seconda concentrazione, come centrifugazione, seguita da patogeno rilevamento e conteggio con metodi culturali o molecolari. I filtri sono diversi vantaggi. La costruzione è semplice ed i filtri possono essere costruiti ad unadimensioni ny per soddisfare le esigenze specifiche di campionamento. Le parti del filtro sono poco costosi, che permettono di raccogliere un gran numero di campioni senza incidere negativamente un bilancio del progetto. Grandi volumi di campione (100s a 1.000 s L) può essere concentrata a seconda del tasso di intasamento di torbidità. I filtri sono facilmente trasportabili e con attrezzatura minima, come una pompa e misuratore di portata, possono essere attuate in campo per il campionamento dell'acqua finito di bere, acque superficiali, sotterranee e scarichi agricoli. Infine, filtrazione lana di vetro è efficace per concentrare una varietà di tipi di patogeni così solo metodo è necessario. Qui riportiamo l'efficacia del filtro di concentrazione acquosa enterovirus umani, S almonella enterica, Cryptosporidium parvum, e il virus dell'influenza aviaria.
Protocollo
1. Preparare la lana di vetro
- Prima e dopo aver fatto ogni partita di filtri, sterilizzare l'area di lavoro con una soluzione di candeggina al 10%.
- Indossare guanti e camice. Sterilizzare un secchio in autoclave a 121 ° C e 15 psi per almeno 20 minuti. Posizionare la lana di vetro nel secchio sterile.
- Saturare la lana di vetro con acqua ad osmosi inversa e lasciare macerare per 15 minuti.
- Scolare l'acqua ad osmosi inversa dal secchio.
- Saturare la lana di vetro con 1 M HCl e lasciate macerare per 15 minuti.
- Scolare la M 1 HCl dal secchio.
- Lavare la lana di vetro con acqua ad osmosi inversa.....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
I filtri di lana di vetro sono stati utilizzati da vari gruppi di ricerca a concentrarsi 3,5,6 virus enterici umani da una varietà di fonti d'acqua, come acqua potabile finito 7, 8,9 acque sotterranee, acque di superficie 10, 11 di acqua di mare, acque reflue 12, e scarichi agricoli 13. Qui riportiamo i filtri sono efficaci anche a concentrare il virus dell'influenza aviaria così come i patogeni batterici e protozoi Salmonella enterica (sierotipo Ty.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.
Ringraziamenti
Ringraziamo William T. Eckert per raccontare il video. Sviluppo del protocollo di lana di vetro faceva parte del Water Wisconsin e Trial Salute per rischi enterica (WAHTER Study), finanziato dalla US EPA STAR di Grant R831630. Alaska campioni sono stati raccolti da A. Reeves, A. Ramey, e B. Meixell con il sostegno finanziario USGS. Qualsiasi uso di nomi commerciali, prodotto o azienda è per scopi descrittivi soltanto e non implica riconoscimento alcuno da parte del governo degli Stati Uniti.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome del reagente o prodotto | Azienda | Numero di catalogo | |
| Acido cloridrico | Fisher Scientific | A144-500 | |
| Idrossido di sodio | Fisher Scientific | BP359-212 | |
| Soluzione tampone fosfato Cloruro di sodio Potassio fosfato bibasico Potassio fosfato monobasico- | Fisher Scientific Fisher Scientific Fisher Scientific | BP358-212 BP363-500 BP362-500 | |
| Ipoclorito di sodio per esempio, candeggina | Il Clorox Co. | ||
| Tiosolfato di sodio, anidro | Fisher Scientific | S 475-212 | |
| Estratto di carne, essiccata | Becton, Dickinson and Company | 211520 | |
| Glycine | Fisher Scientific | G46-500 | |
| Oliato lana di vetro sodocalcic O R-11 isolante in fibra di vetro a vista | Isover ref = target "http://www.jm.com" = "_blank"> Johns Manville | Bourre 725 QN | |
| Mesh in polipropilene | Industrial Netting | xN4510 | |
| 2 "x4" Sch 80 PVC raccordo tubo filettato | Grainger | 6MW35 | |
| 2 "Sch 40 PVC cap | Grainger | 5WDW3 | |
| Maschio nylon Raccordo adattatore (1/2 "x1 / 2") | US Plastic Corp. | 62178 | |
| Bottiglie di esempio per eluato-1 litro | Fisher Scientific | 03-313-4F | |
| 60 mL siringa | Target "http://www.fishersci.com" = "_blank"> Fisher Scientific | NC9661991 | |
| pH strisce | Whatman | 2614 991 | |
| Prefiltro, polipropilene, cartuccia da 10 pollici, 10 pm | McMaster-Carr | 4411K75 | |
| Prefiltro custodia | Cole-Parmer | S-29.820-10 |
Riferimenti
- US Environmental Protection Agency. Method 1623: Cryptosporidium and Giardia in Water by Filtration/IMS/FA. EPA 815-R-05-002. , (2012).
- Cashdollar, J. L., Dahling, D. R. Evaluation of a method to re-use electropositive cartridge fil....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
