Erratum: Culture di timo riaggregate

Sommario

È stata apportata una correzione a: Colture Timiche Riaggregate. Un abstract rivisto è stato ripubblicato a causa di un errore dell'editore.

Abstract

È stata apportata una correzione a: Colture timiche riassemblate. Un abstract rivisto è stato ripubblicato a causa di un errore del editore. L'abstract è stato corretto in:

Le cellule stromali all'interno dei tessuti linfoidi sono organizzate in strutture tridimensionali che formano un'impalcatura ritenuta responsabile del controllo della migrazione e dello sviluppo delle cellule emopoietiche. È importante notare che il mantenimento di questa organizzazione tridimensionale sembra essere fondamentale per la normale funzione delle cellule stromali, poiché spesso è stato dimostrato che colture in monocstrato bidimensionale sono in grado di sostenere soltanto singoli frammenti della funzione del tessuto linfoide. Nel timo, complesse reti di cellule epiteliali corticali e midollari agiscono come una struttura portante che regola il reclutamento, la proliferazione, la differenziazione e la sopravvivenza dei progenitori linfoidi mentre attraversano il processo multistadio dello sviluppo intratimico dei linfociti T. Comprendere il ruolo funzionale di singoli compartimenti stromali nel timo è essenziale per determinare come il timo imponga la discriminazione tra self e non-self. Descriviamo qui una tecnica in cui sfruttiamo la plasticità dei tessuti fetali per riassemblarsi in strutture tridimensionali integre in vitro, dopo la loro disgregazione enzimatica. La dissociazione dei lobi timici fetali in miscele cellulari eterogenee, seguita dalla loro separazione in singoli componenti cellulari, viene quindi combinata con la riassemblaggio in vitro di questi tipi cellulari desiderati in strutture ricostituite tridimensionali in rapporti definiti, fornendo così l'opportunità di indagare aspetti specifici dello sviluppo dei linfociti T in condizioni cellulari controllate. (Questo articolo si basa su un lavoro inizialmente riportato in Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 pagine 185-196).

da

Nel timo, i timociti immaturi CD4+8+ che esprimono geni del recettore per la cellula T a catena α e β riarrangiati in modo casuale subiscono eventi di selezione positiva e negativa in base alla loro capacità di riconoscere complessi peptidici self/molecole del complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) espressi dalle cellule stromali timiche. L'analisi in vivo del ruolo delle cellule stromali timiche durante la selezione intratimica è resa difficile dalla complessità cellulare del microambiente timico nel timo adulto in condizioni di stato stazionario e dalla mancanza di strategie mirate adeguate per manipolare l'espressione genica in specifici compartimenti stromali timici. Abbiamo dimostrato che il microambiente timico può essere facilmente manipolato in vitro ricorrendo a colture organotipiche di timo ricostituito, che consentono la preparazione di lobi timici tridimensionali a partire da cellule stromali e linfoidi ben definite. Sebbene altri sistemi in vitro sostengano alcuni aspetti dello sviluppo delle cellule T, la coltura organotipica di timo ricostituito rimane l'unico sistema in vitro in grado di sostenere in modo efficiente gli eventi di selezione dei timociti mediati dalle classi MHC I e II, e può quindi essere utilizzato come strumento efficace per studiare la regolazione cellulare e molecolare della selezione positiva e negativa nel timo.

Protocollo

È stata apportata una correzione a: Reaggregate Thymus Cultures. Un abstract rivisto è stato ripubblicato a causa di un errore del editore. L'abstract è stato corretto in:

Le cellule stromali all'interno dei tessuti linfoidi sono organizzate in strutture tridimensionali che formano uno scheletro ritenuto responsabile del controllo della migrazione e dello sviluppo delle cellule emopoietiche. È importante notare che il mantenimento di questa organizzazione tridimensionale sembra essere fondamentale per la normale funzione delle cellule stromali, poiché spesso è stato dimostrato che colture in monocstrato bidimensionale riescono a sostenere soltanto singoli aspetti della funzione del tessuto linfoide. Nel timo, complesse reti di cellule epiteliali corticali e midollari costituiscono un'architettura che regola il reclutamento, la proliferazione, la differenziazione e la sopravvivenza dei progenitori linfoidi durante il loro sviluppo T intratimico, un processo che si articola in più stadi. Comprendere il ruolo funzionale di ciascun compartimento stromale nel timo è essenziale per determinare come questo organo imponga la discriminazione tra self e non-self. Di seguito descriviamo una tecnica in cui sfruttiamo la plasticità dei tessuti fetali per ricostituire strutture tridimensionali integre in vitro, dopo la loro dissociazione enzimatica. La dissociazione dei lobi timici fetali in miscele cellulari eterogenee, seguita dalla separazione di queste in singoli componenti cellulari, viene quindi combinata con la ricombinazione in vitro di specifici tipi cellulari in strutture ricostituite tridimensionali, in rapporti definiti, offrendo così la possibilità di indagare aspetti particolari dello sviluppo dei linfociti T in condizioni cellulari controllate. (Questo articolo si basa su un lavoro inizialmente pubblicato in Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 pagine 185-196).

da

Nel timo, i timociti immaturi CD4+8+ che esprimono geni del recettore per cellule T a catena α e β riarrangiati in modo casuale subiscono eventi di selezione positiva e negativa in base alla loro capacità di riconoscere complessi peptidici self/molecole del complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) espressi dalle cellule stromali timiche. L'analisi in vivo del ruolo delle cellule stromali timiche durante la selezione intratimica è resa difficile dalla complessità cellulare del microambiente timico nello stato stazionario del timo adulto e dalla mancanza di strategie di targeting adeguate per manipolare l'espressione genica in specifici compartimenti stromali timici. Abbiamo dimostrato che il microambiente timico può essere facilmente manipolato in vitro ricorrendo a colture organotipiche di timo ricostituito, che permettono la preparazione di lobi tridimensionali di timo a partire da cellule stromali e linfoidi definiti. Sebbene altri sistemi in vitro sostengano alcuni aspetti dello sviluppo delle cellule T, la coltura organotipica di timo ricostituito rimane l'unico sistema in vitro in grado di sostenere in modo efficiente gli eventi di selezione dei timociti mediati dalle molecole MHC di classe I e II, e può pertanto essere utilizzata come strumento efficace per studiare la regolazione cellulare e molecolare della selezione positiva e negativa nel timo.