Erratum: Preparazione di colture d'organo del timo trattate con 2-dGuo

Sommario

È stata apportata una correzione a: Preparazione di colture organotipiche del timo trattate con 2-dGuo. Un abstract rivisto è stato ripubblicato a causa di un errore del editore.

Abstract

È stata apportata una correzione a: Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. Un abstract rivisto è stato ripubblicato a causa di un errore del editore. L'abstract è stato corretto in:

Nel timo, si sa che le interazioni tra precursori di cellule T in via di sviluppo e cellule stromali, che includono cellule epiteliali corticali e midollari, svolgono un ruolo chiave nello sviluppo di un pool di cellule T funzionalmente competente. Tuttavia, la complessità dello sviluppo delle cellule T nel timo in vivo può limitare l'analisi dei singoli componenti cellulari e di fasi specifiche dello sviluppo. I sistemi di coltura in vitro offrono un mezzo facilmente accessibile per studiare numerosi processi cellulari complessi. I sistemi di coltura organica del timo rappresentano un approccio ampiamente utilizzato per studiare lo sviluppo intratimico delle cellule T in condizioni definite in vitro. Qui descriviamo un sistema in cui i lobi timici di embrioni di topo possono essere privati degli elementi emopoietici endogeni mediante una pregressa coltura organica in 2-deossiguanosina, un composto selettivamente tossico per le cellule emopoietiche. Oltre a fornire una fonte facilmente accessibile di cellule stromali timiche per indagare il ruolo dei microambienti timici nello sviluppo e nella selezione delle cellule T, questa tecnica costituisce anche la base per ulteriori approcci sperimentali, tra cui la ricostruzione in vitro di lobi timici a linfociti con elementi emopoietici definiti, il trapianto di timi a linfociti in topi riceventi e la formazione di colture organiche timiche riaggregate. (Questo articolo si basa su un lavoro inizialmente riportato in Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380, pagine 185-196).

da

Nel timo, i timociti immaturi CD4+8+ che esprimono geni del recettore per la cellula T a catena α e β riarrangiati in modo casuale subiscono eventi di selezione positiva e negativa in base alla loro capacità di riconoscere complessi peptidici self/molecole del complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) espressi dalle cellule stromali timiche. L'analisi in vivo del ruolo delle cellule stromali timiche durante la selezione intratimica è resa difficile dalla complessità cellulare del microambiente timico nel timo adulto in condizioni di stato stazionario e dalla mancanza di strategie di targeting adeguate per manipolare l'espressione genica in specifici compartimenti stromali timici. Abbiamo dimostrato che il microambiente timico può essere facilmente manipolato in vitro ricorrendo a colture organotipiche di timo ricostituito, che permettono la preparazione di lobi timici tridimensionali a partire da cellule stromali e linfoidi ben definite. Sebbene altri sistemi in vitro sostengano alcuni aspetti dello sviluppo delle cellule T, la coltura organotipica di timo ricostituito rimane l'unico sistema in vitro in grado di sostenere in modo efficiente gli eventi di selezione dei timociti mediati dalle classi MHC I e II, e può quindi essere utilizzata come strumento efficace per studiare la regolazione cellulare e molecolare della selezione positiva e negativa nel timo.

Protocollo

È stata apportata una correzione a: Preparazione di colture organotipiche del timo trattate con 2-dGuo. Un abstract rivisto è stato ripubblicato a causa di un errore del editore. L'abstract è stato corretto in:

Nel timo, si sa che le interazioni tra precursori di cellule T in via di sviluppo e cellule stromali, che includono cellule epiteliali corticali e midollari, svolgono un ruolo chiave nello sviluppo di un pool di cellule T funzionalmente competente. Tuttavia, la complessità dello sviluppo delle cellule T nel timo in vivo può limitare l'analisi di singoli componenti cellulari e di fasi particolari dello sviluppo. I sistemi di coltura in vitro offrono un mezzo facilmente accessibile per studiare numerosi processi cellulari complessi. I sistemi di coltura organica del timo rappresentano un approccio ampiamente utilizzato per studiare lo sviluppo intratimico delle cellule T in condizioni definite in vitro. Qui descriviamo un sistema in cui i lobi timici di embrioni di topo possono essere privati degli elementi emopoietici endogeni mediante una pregressa coltura organica in 2-deossiguanosina, un composto selettivamente tossico per le cellule emopoietiche. Oltre a fornire una fonte facilmente accessibile di cellule stromali timiche per indagare il ruolo dei microambienti timici nello sviluppo e nella selezione delle cellule T, questa tecnica costituisce anche la base per ulteriori approcci sperimentali, tra cui la ricostruzione in vitro di lobi timici a linfociti con elementi emopoietici definiti, il trapianto di timi a linfociti in topi riceventi e la formazione di colture organiche timiche riassemblate. (Questo articolo si basa su un lavoro inizialmente riportato in Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380, pagine 185-196).

da

Nel timo, i timociti immaturi CD4+8+ che esprimono geni del recettore per la cellula T a catena α e β riarrangiati in modo casuale subiscono eventi di selezione positiva e negativa in base alla loro capacità di riconoscere complessi peptidici self/molecole del complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) espressi dalle cellule stromali timiche. L'analisi in vivo del ruolo delle cellule stromali timiche durante la selezione intratimica è resa difficile dalla complessità cellulare del microambiente timico nel timo adulto in condizioni di stato stazionario e dalla mancanza di strategie mirate adeguate per manipolare l'espressione genica in specifici compartimenti stromali timici. Abbiamo dimostrato che il microambiente timico può essere facilmente manipolato in vitro attraverso l'utilizzo di colture organotipiche di timo ricostituito, che permettono la preparazione di lobi timici tridimensionali a partire da cellule stromali e linfoidi ben definite. Sebbene altri sistemi in vitro sostengano alcuni aspetti dello sviluppo delle cellule T, la coltura organotipica di timo ricostituito rimane l'unico sistema in vitro in grado di sostenere in modo efficiente gli eventi di selezione dei timociti mediati dalle classi MHC I e II, e può quindi essere utilizzato come strumento efficace per studiare la regolazione cellulare e molecolare della selezione positiva e negativa nel timo.