Il metodo descritto l'isolamento e la caratterizzazione di cellule staminali dentali umane Pulp (hDPSCs) utilizzando Dissociazione enzimatica della polpa (DPSC-DE) O Conseguenza diretta di cellule staminali da espianti di tessuto pulpare (DPSC-OG). Seguito da In vitro Differenziazione comparativa di entrambi i tipi di hDPSCs in odontoblasti.
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Articolo metodologico
Differenziazione Isolamento, caratterizzazione e comparata delle cellule umane Dental Pulp staminali derivate da denti permanenti mediante due diversi metodi
In questo articolo
Sommario
Introduzione
Le cellule staminali sono cellule clonogeniche che possiedono due caratteristiche notevoli, conosciuti come multi-potenza e di auto-rinnovamento 15. Tra tutte le cellule staminali con diverse potenze replicative, le cellule staminali dentali come le cellule staminali post-natali hanno attirato l'attenzione negli ultimi anni, a causa della loro accessibilità, plasticità, e ad alta capacità proliferativa rispetto ad altre cellule staminali adulte 16. Caratteristicamente, simili alle cellule staminali mesenchimali, cellule staminali polpa dentale sono aderenti cellule clonogeniche aventi capacità multipla differenziazione in mesenchima e / o no....
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Protocollo
1. Preparare la soluzione enzimatica e medie proliferazione (PM)
- Marca Collagenasi I Soluzione: Pesare, collagenasi di tipo I (12 mg / ml) e sciogliere in 1 ml di PBS e filtro con un filtro 0,2 micron siringa. Poi posto 15 ml tubetto e la tiene a -20 ° C fino al momento dell'uso.
- Fai Soluzione dispasi: Pesare dispasi (16 mg / ml) e sciogliere in 1 ml di PBS e filtro con un filtro 0,2 micron siringa. Poi posto 15 ml tubetto e la tiene a 4 ° C fino al momento dell'uso.
- Rendere soluzione enzimatica: Aggiungere 1 ml di collagenasi di tipo I soluzioni (12 mg / ml) e 1 ml di soluzioni....
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Risultati
- DPSCs che sono stati ottenuti dalla dissociazione enzimatica (DPSC-ED) sono mostrati qui a 10 giorni, 15,18 (Figura 1). Le colonie avviato per formare su quasi 3 a 5 giorni dopo l'isolamento.
- DPSCs superato (DPSC-OG) sono mostrati nella Figura 2, il giorno 5, 10, 13 e 18. Fibroblasto-simili cellule hanno cominciato a migrare dal tessuto pulpare nel pallone da parallelo ordinazione quasi 5 giorni dopo la semina.
- DPSCs al passaggio 3 utilizzando entrambi i metodi sono illu.......
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Discussione
Questo protocollo descrive il processo di isolamento e caratterizzazione di hDPSCs da polpa dentale utilizzando due metodi, dissociazione enzimatica e la conseguenza diretta di cellule staminali da espianti di tessuto pulpare. Inoltre, in vitro differenziazione di queste cellule in odontoblasti, è stata valutata mediante dosaggio quantitativo Rosso alizarina S & QPCR.
Protocolli esistenti per isolare dal tessuto pulpare dente umano era stato utilizzato diversi strumenti quali pi.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Si ringrazia il Dr. Leila Shakeri & Dr. Aref Dournaei per la loro discus critica e Mohammad Reza Khadem Sharif per i suoi supporti tecnici.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome del reagente | Azienda | Catalogo o Lotto. numero | Commenti (opzionale) |
| α-MEM | GIBCO | 11900-073 | |
| Collagenasi tipo I | Sigma-Aldrich | C0130-100MG | |
| Dispasi | GIBCO | 17105-041 | |
| Penicillina / streptomicina | GIBCO | 15140-122 | |
| Amfotericina B | GIBCO | 15290-018 | |
| Siero fetale bovino definito (FBS) | HyClone | SH30070.03 | |
| L-ascorbico 2-fosfato | Sigma | A8960-5G | |
| L-glutammina | GIBCO | 25030-024 | |
| Desametasone | Sigma | D4902 | |
| β-Glicerolo sale idrato fosfato disodico, BioUltra | Sigma | G9422-100G | |
| Potassio fosfato monobasico | Sigma-Aldrich | P5655 | |
| Osteogenesi Assay Kit | Millipore | PS01802031 | |
| Mouse IgG2b-PE isotipo di controllo | BD Pharmingen | 50808088029 | |
| FITC del mouse IgG2b isotipo di controllo | BD Pharmingen | 559532 | |
| Del mouse FITC IgG1 isotipo κ | BD Pharmingen | 11471471 | |
| FITC / PE topo anti-umano CD34/CD45 | BD Pharmingen | 341071 | |
| PE anti-CD146 umano | BD Pharmingen | 550315 | |
| Monoclonale murino anti-umano CD90/FITC | Daka | 00034418 | |
| PE di topo anti-CD73 umano | BD Pharmingen | 550257 | |
| Anti-h CD105/Endoglin PE | BD Pharmingen | FAB10971P | |
| PE topo anti-umana CD11b/Mac1 | BD Pharmingen | 5553888 | |
| CD44 PE topo anti umano | BD Pharmingen | 555479 | |
| Soluzione tampone fosfato (PBS) | GIBCO | 003000 | |
| 70-micron cella filtro | Falco | 352360 | |
| 0,2 micron filtro a siringa | Millex-GV | SLGV033RB | |
| 25 cm 2 cultura pallone | Sigma-Aldrich | Z707481 | |
| ATTREZZATURE | |||
| BD FACSCalibur | BD | 342975 | |
| Multiskan spettrofotometro per micropiastre | Thermo Scientific | 51119200 | |
| Fleurcense Microscopio | Olimpo | ||
| Flowing Versione software 2.3.1 |
Riferimenti
- Volponi, A. A., Pang, Y., Sharpe, P. T. Stem cell-based biological tooth repair and regeneration. Trends Cell Biol. 20, 715-722 (2010).
- Nosrat, I. V., Widenfalk, J., Olson, L., Nosrat, C. A. Dental pulp cells produce n....
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Ristampe e permessi
