Articolo metodologico

Differenziazione Isolamento, caratterizzazione e comparata delle cellule umane Dental Pulp staminali derivate da denti permanenti mediante due diversi metodi

DOI:

10.3791/4372

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24 novembre 2012

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1Department of Stem Cells and Developmental Biology, Cell Science Research Center, Royan Institute for Stem Cell Biology and Technology, ACECR, Tehran, Iran, 2Department of Endocrinology & Female Infertility, Reproductive Biomedicine Center, Royan Institute for Reproductive Biomedicine, ACECR, Tehran, Iran

In questo articolo

Sommario

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Il metodo descritto l'isolamento e la caratterizzazione di cellule staminali dentali umane Pulp (hDPSCs) utilizzando Dissociazione enzimatica della polpa (DPSC-DE) O Conseguenza diretta di cellule staminali da espianti di tessuto pulpare (DPSC-OG). Seguito da In vitro Differenziazione comparativa di entrambi i tipi di hDPSCs in odontoblasti.

Introduzione

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Le cellule staminali sono cellule clonogeniche che possiedono due caratteristiche notevoli, conosciuti come multi-potenza e di auto-rinnovamento 15. Tra tutte le cellule staminali con diverse potenze replicative, le cellule staminali dentali come le cellule staminali post-natali hanno attirato l'attenzione negli ultimi anni, a causa della loro accessibilità, plasticità, e ad alta capacità proliferativa rispetto ad altre cellule staminali adulte 16. Caratteristicamente, simili alle cellule staminali mesenchimali, cellule staminali polpa dentale sono aderenti cellule clonogeniche aventi capacità multipla differenziazione in mesenchima e / o no....

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Protocollo

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1. Preparare la soluzione enzimatica e medie proliferazione (PM)

  1. Marca Collagenasi I Soluzione: Pesare, collagenasi di tipo I (12 mg / ml) e sciogliere in 1 ml di PBS e filtro con un filtro 0,2 micron siringa. Poi posto 15 ml tubetto e la tiene a -20 ° C fino al momento dell'uso.
  2. Fai Soluzione dispasi: Pesare dispasi (16 mg / ml) e sciogliere in 1 ml di PBS e filtro con un filtro 0,2 micron siringa. Poi posto 15 ml tubetto e la tiene a 4 ° C fino al momento dell'uso.
  3. Rendere soluzione enzimatica: Aggiungere 1 ml di collagenasi di tipo I soluzioni (12 mg / ml) e 1 ml di soluzioni....

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Risultati

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  1. DPSCs che sono stati ottenuti dalla dissociazione enzimatica (DPSC-ED) sono mostrati qui a 10 giorni, 15,18 (Figura 1). Le colonie avviato per formare su quasi 3 a 5 giorni dopo l'isolamento.
  2. DPSCs superato (DPSC-OG) sono mostrati nella Figura 2, il giorno 5, 10, 13 e 18. Fibroblasto-simili cellule hanno cominciato a migrare dal tessuto pulpare nel pallone da parallelo ordinazione quasi 5 giorni dopo la semina.
  3. DPSCs al passaggio 3 utilizzando entrambi i metodi sono illu.......

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Discussione

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Questo protocollo descrive il processo di isolamento e caratterizzazione di hDPSCs da polpa dentale utilizzando due metodi, dissociazione enzimatica e la conseguenza diretta di cellule staminali da espianti di tessuto pulpare. Inoltre, in vitro differenziazione di queste cellule in odontoblasti, è stata valutata mediante dosaggio quantitativo Rosso alizarina S & QPCR.

Protocolli esistenti per isolare dal tessuto pulpare dente umano era stato utilizzato diversi strumenti quali pi.......

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Dichiarazioni

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Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Ringraziamenti

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Si ringrazia il Dr. Leila Shakeri & Dr. Aref Dournaei per la loro discus critica e Mohammad Reza Khadem Sharif per i suoi supporti tecnici.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Nome del reagente Azienda Catalogo o Lotto. numero Commenti (opzionale)
α-MEM GIBCO 11900-073
Collagenasi tipo I Sigma-Aldrich C0130-100MG
Dispasi GIBCO 17105-041
Penicillina / streptomicina GIBCO 15140-122
Amfotericina B GIBCO 15290-018
Siero fetale bovino definito (FBS) HyClone SH30070.03
L-ascorbico 2-fosfato Sigma A8960-5G
L-glutammina GIBCO 25030-024
Desametasone Sigma D4902
β-Glicerolo sale idrato fosfato disodico, BioUltra Sigma G9422-100G
Potassio fosfato monobasico Sigma-Aldrich P5655
Osteogenesi Assay Kit Millipore PS01802031
Mouse IgG2b-PE isotipo di controllo BD Pharmingen 50808088029
FITC del mouse IgG2b isotipo di controllo BD Pharmingen 559532
Del mouse FITC IgG1 isotipo κ BD Pharmingen 11471471
FITC / PE topo anti-umano CD34/CD45 BD Pharmingen 341071
PE anti-CD146 umano BD Pharmingen 550315
Monoclonale murino anti-umano CD90/FITC Daka 00034418
PE di topo anti-CD73 umano BD Pharmingen 550257
Anti-h CD105/Endoglin PE BD Pharmingen FAB10971P
PE topo anti-umana CD11b/Mac1 BD Pharmingen 5553888
CD44 PE topo anti umano BD Pharmingen 555479
Soluzione tampone fosfato (PBS) GIBCO 003000
70-micron cella filtro Falco 352360
0,2 micron filtro a siringa Millex-GV SLGV033RB
25 cm 2 cultura pallone Sigma-Aldrich Z707481
ATTREZZATURE
BD FACSCalibur BD 342975
Multiskan spettrofotometro per micropiastre Thermo Scientific 51119200
Fleurcense Microscopio Olimpo
Flowing Versione software 2.3.1

Riferimenti

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  1. Volponi, A. A., Pang, Y., Sharpe, P. T. Stem cell-based biological tooth repair and regeneration. Trends Cell Biol. 20, 715-722 (2010).
  2. Nosrat, I. V., Widenfalk, J., Olson, L., Nosrat, C. A. Dental pulp cells produce n....

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