Differenziazione Isolamento, caratterizzazione e comparata delle cellule umane Dental Pulp staminali derivate da denti permanenti mediante due diversi metodi

Summary

Il metodo descritto l'isolamento e la caratterizzazione di cellule staminali dentali umane Pulp (hDPSCs) utilizzando Dissociazione enzimatica della polpa (DPSC-DE) O Conseguenza diretta di cellule staminali da espianti di tessuto pulpare (DPSC-OG). Seguito da In vitro Differenziazione comparativa di entrambi i tipi di hDPSCs in odontoblasti.

Introduction

Le cellule staminali sono cellule clonogeniche che possiedono due caratteristiche notevoli, conosciuti come multi-potenza e di auto-rinnovamento ^15. Tra tutte le cellule staminali con diverse potenze replicative, le cellule staminali dentali come le cellule staminali post-natali hanno attirato l'attenzione negli ultimi anni, a causa della loro accessibilità, plasticità, e ad alta capacità proliferativa rispetto ad altre cellule staminali adulte ^16. Caratteristicamente, simili alle cellule staminali mesenchimali, cellule staminali polpa dentale sono aderenti cellule clonogeniche aventi capacità multipla differenziazione in mesenchima e / o no....

Protocol

1. Preparare la soluzione enzimatica e medie proliferazione (PM)

1. Marca Collagenasi I Soluzione: Pesare, collagenasi di tipo I (12 mg / ml) e sciogliere in 1 ml di PBS e filtro con un filtro 0,2 micron siringa. Poi posto 15 ml tubetto e la tiene a -20 ° C fino al momento dell'uso.
2. Fai Soluzione dispasi: Pesare dispasi (16 mg / ml) e sciogliere in 1 ml di PBS e filtro con un filtro 0,2 micron siringa. Poi posto 15 ml tubetto e la tiene a 4 ° C fino al momento dell'uso.
3. Rendere soluzione enzimatica: Aggiungere 1 ml di collagenasi di tipo I soluzioni (12 mg / ml) e 1 ml di soluzioni....

Results

1. DPSCs che sono stati ottenuti dalla dissociazione enzimatica (DPSC-ED) sono mostrati qui a 10 giorni, 15,18 (Figura 1). Le colonie avviato per formare su quasi 3 a 5 giorni dopo l'isolamento.
2. DPSCs superato (DPSC-OG) sono mostrati nella Figura 2, il giorno 5, 10, 13 e 18. Fibroblasto-simili cellule hanno cominciato a migrare dal tessuto pulpare nel pallone da parallelo ordinazione quasi 5 giorni dopo la semina.
3. DPSCs al passaggio 3 utilizzando entrambi i metodi sono illustra.......

Discussion

Questo protocollo descrive il processo di isolamento e caratterizzazione di hDPSCs da polpa dentale utilizzando due metodi, dissociazione enzimatica e la conseguenza diretta di cellule staminali da espianti di tessuto pulpare. Inoltre, in vitro differenziazione di queste cellule in odontoblasti, è stata valutata mediante dosaggio quantitativo Rosso alizarina S & QPCR.

Protocolli esistenti per isolare dal tessuto pulpare dente umano era stato utilizzato diversi strumenti quali pi.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nome del reagente	Azienda	Catalogo o Lotto. numero	Commenti (opzionale)
α-MEM	GIBCO	11900-073
Collagenasi tipo I	Sigma-Aldrich	C0130-100MG
Dispasi	GIBCO	17105-041
Penicillina / streptomicina	GIBCO	15140-122
Amfotericina B	GIBCO	15290-018
Siero fetale bovino definito (FBS)	HyClone	SH30070.03
L-ascorbico 2-fosfato	Sigma	A8960-5G
L-glutammina	GIBCO	25030-024
Desametasone	Sigma	D4902
β-Glicerolo sale idrato fosfato disodico, BioUltra	Sigma	G9422-100G
Potassio fosfato monobasico	Sigma-Aldrich	P5655
Osteogenesi Assay Kit	Millipore	PS01802031
Mouse IgG2b-PE isotipo di controllo	BD Pharmingen	50808088029
FITC del mouse IgG2b isotipo di controllo	BD Pharmingen	559532
Del mouse FITC IgG1 isotipo κ	BD Pharmingen	11471471
FITC / PE topo anti-umano CD34/CD45	BD Pharmingen	341071
PE anti-CD146 umano	BD Pharmingen	550315
Monoclonale murino anti-umano CD90/FITC	Daka	00034418
PE di topo anti-CD73 umano	BD Pharmingen	550257
Anti-h CD105/Endoglin PE	BD Pharmingen	FAB10971P
PE topo anti-umana CD11b/Mac1	BD Pharmingen	5553888
CD44 PE topo anti umano	BD Pharmingen	555479
Soluzione tampone fosfato (PBS)	GIBCO	003000
70-micron cella filtro	Falco	352360
0,2 micron filtro a siringa	Millex-GV	SLGV033RB
25 cm 2 cultura pallone	Sigma-Aldrich	Z707481
			ATTREZZATURE
BD FACSCalibur	BD	342975
Multiskan spettrofotometro per micropiastre	Thermo Scientific	51119200
Fleurcense Microscopio	Olimpo
Flowing Versione software 2.3.1