Gli antigeni Protetto funzionali globuli rossi dalla membrana innesto di Compact Poligliceroli Hyperbranched

Sommario

La modifica membrana cellulare dei globuli rossi (RBC) con poliglicerolo hyperbranched (HPG) è presentato. RBC modificati sono stati caratterizzati da due partizionamento fase acquosa, la fragilità osmotica e lisi complemento mediata. Il camuffamento di proteine ​​di superficie e degli antigeni è stata valutata utilizzando la citometria a flusso e sistema Micro Typing (MTS) carte fenotipizzazione sangue.

Abstract

Globuli rossi (RBC) trasfusione è vitale per il trattamento di una serie di problemi medici acuti e cronici come talassemia e anemia falciforme ^1-3. A causa della presenza di numerosi antigeni sulla superficie RBC (~ 308 antigeni noti ^4), pazienti in terapia cronica trasfusione sviluppano alloanticorpi causa della partita miss di antigeni minori di eritrociti trasfusi ^{4, 5.} Innesto di polimeri idrofili come polietilene glicole (PEG) e poliglicerolo hyperbranched (HPG) forma uno strato di esclusione sulla membrana RBC che previene l'interazione di anticorpi con antigeni di superficie senza influenzare il passaggio di piccole molecole come l'ossigeno, glucosio, e ioni ^3. Attualmente è disponibile alcun metodo per la generazione di globuli rossi donatori universali in parte a causa della difficile sfida presentata dalla presenza di un gran numero di antigeni (proteine ​​e carboidrati base) sulla superficie RBC e la dviluppo di tali metodi migliorerà in modo significativo la sicurezza delle trasfusioni, e drammaticamente migliorare la disponibilità e l'uso di globuli rossi. In questa relazione, gli esperimenti che vengono utilizzati per sviluppare antigene RBC funzionali protetti dalla membrana innesto di HPG e loro caratterizzazione vengono presentati. HPGs sono altamente biocompatibili polimeri compatte ^{6, 7,} e dovrebbero essere situata all'interno della cella glicocalice che circonda la membrana lipidica ^{8, 9} e maschera RBC antigeni di superficie ^{10, 11.}

Protocollo

A. Modifica poliglicerolo Hyperbranched (SS-HPG)

1. Posto liofilizzato HPG 60 kDa (0,5 g, 0,0083 mmol) in un pallone a fondo tondo e asciugare una notte sotto vuoto a 90 ° C.
2. Refrigerare il matraccio a temperatura ambiente, e sciogliere il HPG essiccato in piridina anidra (3 ml).
3. Per funzionalizzare circa otto gruppi ossidrilici su HPG con gruppi carbossilici, aggiungere quantità catalitica di dimetilamminopiridina (una goccia di 5 mg / ml di soluzione in piridina) alla soluzione HPG. A questa miscela, aggiungere anidride succinica, (0,0067 g, 0,0664 mmol) sciolto in 0,5 ml di piridina saggio goccia in 10 minuti. Agitare la miscela per una....

Risultati

Mascherano di antigene Rhesus D e CD47 proteina di superficie RBC sono stati quantificati mediante citometria a flusso utilizzando fluorescenti anticorpi monoclonali marcati, e un risultato rappresentativo è riportato in figura 1. In caso di HPG-innestati GR (grigio), l'intensità del segnale è diminuito (picco spostato a sinistra) rispetto al controllo RBC (rosso e verde) indica una riduzione nel legarsi agli anticorpi di superficie cellulare che indicano il mascheramento delle proteine ​​di superfi.......

Discussione

RBC donatori universali hanno un grande potenziale disponibilità del sangue ed il di sicurezza per la terapia trasfusionale. Globuli rossi sono considerati promettenti veicoli di somministrazione di farmaci per la loro circolazione lungo e biocompatibilità intrinseca ^{14, 15.} Esperimenti presentati in questo documento valutare la caratteristiche in vitro di HPG RBC modificati. La proprietà in vitro e in vivo di circolazione HPG globuli rossi modificati sono stati studiati nel nostro .......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Glycidol	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Trimethylolpropane	Fluka		(ON, Canada)
Metilato di potassio	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Anidro piridina	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
4-dimetilamminopiridina	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Anidride succinica	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Acetone	Fisher Scientific		(ON, Canada)
Anidro dimetilformammide	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
N-Hydroxysuccinimide	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
N, N'-diisopropilcarbodiimmide	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
MTS carte			Micro Typing System (MTS) carte (FL, USA)
Destrano 500 kDa	Pharmacia Fine Chemicals		(Svezia)
PEG 8 kDa	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
FITC anticorpo monoclonale anti-Rhesus D (Rh)	Quoziente Biodiagnostics		(PA, USA)
PE anticorpo monoclonale anti-CD47	BD Biosciences		(NJ, USA)
Reagente Drabkin di	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
			Tabella. Prodotti chimici e reagenti utilizzati per l'innesto di HPG polimeri a RBC membrana e la loro analisi.