Microscopia intravitale del microcircolo cremastere topo M. offre un unico e ben standardizzato-modello in vivo per l'analisi del midollo osseo migrazione di cellule staminali periferiche.
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Articolo metodologico
Microscopia intravitale del microcircolo nel muscolo mouse Cremaster per l'analisi di migrazione delle cellule staminali periferiche
In questo articolo
Sommario
Abstract
Nell'era della intravascolari protocolli di applicazione di cellule nel contesto della terapia cellulare rigenerativa, i meccanismi alla base della migrazione di cellule staminali per nonmarrow tessuto non sono stati completamente chiariti. Descriviamo qui la tecnica della microscopia intravitale applicata al cremastere microcircolazione del mouse per l'analisi del midollo osseo periferico migrazione delle cellule staminali in vivo. Microscopia intravitale del cremastere M. è stato precedentemente introdotto nel campo della ricerca infiammatorio per l'osservazione diretta dell'interazione dei leucociti con l'endotelio vascolare. Da staminali periferiche sufficiente e la migrazione delle cellule progenitrici include analoghe fasi iniziali di laminazione lungo e ferma adesione alla endoteliali che rivestono è concepibile applicare il modello cremastere M. per l'osservazione e la quantificazione dell'interazione delle cellule staminali somministrate intravasculary con l'endotelio. Come vari componenti chimici possono essere applicati selettivamente al bersaglio trilascio da semplici tecniche di superfusione, è possibile stabilire condizioni essenziali del microambiente, per l'assunzione iniziale di cellule staminali che si terrà in un organismo vivente al di fuori del midollo osseo.
Introduzione
Lo scopo del presente articolo è quello di descrivere la tecnica della microscopia intravitale (IVM) applicato sul cremastere microcircolazione del mouse per l'osservazione diretta e l'analisi del midollo osseo migrazione di cellule staminali periferiche.
Rigenerazione dei tessuti e organi Il concetto attuale di cellule staminali basato comporta la homing delle cellule staminali del midollo osseo al tessuto danneggiato 1. Un passo fondamentale per la migrazione di cellule staminali successo include staminali interazione delle cellule con l'endotelio locale all'interno dell'organo feriti seguita dalla migrazi....
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Protocollo
L'intero protocollo dopo l'isolamento delle cellule richiede circa 2 ore.
1. Microsurgical Preparazione
- Eseguire isolamento delle cellule staminali del midollo osseo del donatore e marcatura fluorescente della sottopopolazione isolato secondo protocolli standardizzati 9,12 permettere alle cellule di riposare durante il tempo viene eseguita l'operazione animale. Per l'etichettatura fluorescente ti consigliamo di CFDA (Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl estere).
- Anestetizzare un topo maschio pesa 20-25 g con ketamina (75 mg / kg) e xilazina (2,5 mg / kg). Nel corso degli interventi chir....
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Risultati
In generale, l'interazione di direttamente iniettato cellule staminali o progenitrici con l'endotelio vascolare all'interno della microcircolazione cremastere muscolare è un evento raro e avviene esclusivamente in venule postcapillari (diametro: 30-80 micron). A causa fluorescenza etichettatura rotolamento e cellule staminali saldamente aderenti possono essere chiaramente quantificati in separazione da leucociti circolanti endogeni nelle venule osservati (Figura 2).
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Discussione
Microscopia a fluorescenza intravital permette la visualizzazione diretta e l'analisi quantitativa delle interazioni cellula-endotelio staminali. Il modello cremastere muscolare è particolarmente utile, poiché l'esposizione microchirurgico e le tecniche di visualizzazione intravitale sono stati ben stabiliti nel corso della ricerca sulle interazioni leucociti-endotelio e vari componenti chimici può essere applicato selettivamente al tessuto bersaglio semplice tecnica superfusione. A causa dell'assenza .......
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Dichiarazioni
Tutti gli esperimenti sugli animali, condotti per questo manoscritto sono stati approvati dalla cura degli animali e l'uso comitato locale.
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Carbossi-fluoresceina diacetato succinimidylester (CFDA) | Invitrogen, Carlsbad, CA, USA | C1157 | |
| Rhodamine 6 G (1%) | Sigma-Aldrich, Monaco di Baviera, Germania | 83697 | |
| Ketamin (Ketanest) | Pfizer, Berlin, Germany | non disponibile | |
| Xilacina (Rompun) | Bayer, Leverkusen, Germania | non disponibile | |
| Fosfato di Dulbecco - soluzione salina tamponata (PBS) | PAN Biotech, Aidenbach, Germania | P04-36500 |
Riferimenti
- Madlambayan, G. J., et al. marrow stem and progenitor cell contribution to neovasculogenesis is dependent on model system with SDF-1 as a permissive trigger. Blood. 114, 4310-4319 (2009).
- Lapidot, T., Dar, A., Kollet, O. How do stem cells find their way....
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Ristampe e permessi
