Xenotrapianti tumorali umani in topi immunodeficienti sono strumenti preziosi per studiare biologia del cancro. Sono descritti i protocolli specifici per generare xenotrapianti sottocutanei e intraepatiche da cellule di carcinoma epatocellulare umani o frammenti di tumore. Rigenerazione epatica indotta da epatectomia parziale in topi riceventi si presenta come una strategia per facilitare l'attecchimento intraepatica.
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Articolo metodologico
Generazione di sottocutaneo e intraepatica umane carcinoma epatocellulare xenotrapianti in topi immunodeficienti
In questo articolo
Sommario
Abstract
In vivo modelli sperimentali di carcinoma epatocellulare (HCC) che ricapitolano la malattia umana forniscono una valida piattaforma per la ricerca in fisiopatologia della malattia e per la valutazione preclinica di nuove terapie. Presentiamo una varietà di metodi per generare sottocutaneo o ortotopico xenotrapianti HCC umano in topi immunodeficienti che potrebbe essere utilizzato in una varietà di applicazioni di ricerca. Con un focus sull'uso del tessuto tumorale primario da pazienti sottoposti a resezione chirurgica come punto di partenza, si descrive la preparazione di sospensioni di cellule tumorali o frammenti di xenotrapianto. Descriviamo tecniche specifiche per xenotrapianto questi tessuti i) per via sottocutanea, oppure ii) intraepaticamente, mediante impianto diretto di cellule tumorali o frammenti nel fegato, o indirettamente mediante iniezione di cellule nella milza mouse. Noi descriviamo anche l'uso di resezione parziale del fegato di topo nativo al momento di xenotrapianto come strategia perindurre uno stato di rigenerazione epatica attiva nel topo ricevente che può facilitare l'attecchimento intraepatica di cellule primarie tumorali umane. I risultati attesi di queste tecniche sono illustrate. I protocolli descritti sono stati convalidati usando campioni di HCC umani elementari e xenotrapianti, che in genere svolgono meno robusto rispetto alle linee cellulari di HCC umano consolidate che sono ampiamente utilizzati e frequentemente citati nella letteratura. In confronto con linee cellulari, discutiamo i fattori che possono contribuire alla relativamente bassa probabilità di attecchimento primaria HCC in modelli di xenotrapianto e commentare su questioni tecniche che possono influenzare la cinetica della crescita xenotrapianto. Suggeriamo anche i metodi che devono essere applicate per garantire che xenotrapianti ottenuti ricordano con precisione i tessuti di HCC genitore.
Introduzione
Il carcinoma epatocellulare (HCC) è il quinto tumore più comune al mondo e la più rapida crescita causa di morte per cancro in Nord America. Il fattore di rischio prevalente per HCC è la cirrosi epatica, più frequentemente si verificano a causa di epatite cronica virale, l'abuso di alcol, malattie autoimmuni o disturbi metabolici ereditari 1.
Nonostante il carico di malattia pesante imposto dalla HCC sulle popolazioni mondiali, la fisiopatologia di HCC è relativamente poco compresa in confronto ad altri tumori comuni come colon, seno, o cancro alla prostata. Ad esempio, gli eventi molecolari e cellulari specifici di guida t....
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Protocollo
Una panoramica schematica del protocollo è presentata nella Figura 1.
1. Elaborazione di HCC umano Campioni
Ottenere campioni di HCC umano primarie con il consenso scritto del paziente e con l'approvazione del comitato etico della ricerca istituzionale. Questi protocolli sono stati eseguiti presso il nostro istituto, con l'approvazione del Comitato Etico Research University Health Network in conformità a tutte le linee guida istituzionali, nazionali e internazionali per il benessere umano.
Prelevare i campioni di HCC freschi appena possibile dopo l'interv....
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Risultati
Figura 3 illustra l'aspetto tipico di un sottocutanea xenotrapianto HCC umano e il corrispondente aspetto istopatologico del tumore. Lo sviluppo e la crescita degli xenotrapianti sottocutanee possono essere facilmente monitorati dal quotidiano esame di topi riceventi. L'intervallo di tempo tra xenotrapianto e lo sviluppo di un tumore può variare notevolmente a seconda del tipo di tessuto (tumore frammento vs sospensione cellulare), fonte di tessuto (campione primario paziente, xenotrapianto dive.......
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Discussione
Abbiamo descritto una varietà di tecniche per stabilire sottocutanea e intraepatiche xenotrapianti HCC umano in topi immunodeficienti che può essere applicata a una vasta gamma di domande e saggi sperimentali. Mentre xenotrapianti sottocutanei sono stati ampiamente utilizzati per studiare vari aspetti della biologia HCC, xenotrapianti intraepatiche sono raramente descritti in letteratura. Inoltre, la maggior parte degli studi che descrivono l'uso di xenotrapianti hanno generato questi da linee cellulari ben consolid.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato da una Canadesi Institutes of Health Research Fase 1 Clinico-Scientist Award (AG) e una sovvenzione di funzionamento dal Cancer Research Society (AG). Gli autori sono grati al Dr. John Dick per il suo sostegno di questo progetto.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Dulbecco’ s Mod. Aquila Medium/Ham’ s F12 50/50 Miscela x1(DMEM-F12) | WISENT Bioproducts | 319-075-CL | |
| Collagenasi di tipo IV | Sigma-Aldrich | C5138 | |
| Dispase II | Stemcell Technologies | 7923 | |
| Matrice Matrigel | Becton-Dickinson Biosciences | 354234 | |
| Soluzione di formalina tamponata al 10 % | Sigma-Aldrich | HT501128 | |
| 0,9 % Soluzione salina Soluzione (NaCl), sterile | House Brand | 1011-L8001 | |
| Scrub chirurgico Betadine | Purdue Pharma | NPN 00158313 | |
| Buprenorfina (Temegesic) NR 0,3 mg/ml | Reckitt Benckiser | ||
| Isoflurane USP, 99,9 %, anestetico per inalazione | Pharmaceutical Partners of Canada Inc. | M60302 | |
| Tear-Gel | Novartis Pharmaceuticals | ||
| Composto per sezioni congelate | VWR | 95057-838 | |
| Cryomold, Tissue -Tek | Sakura Finetek | 4566 | |
| Precision Glide Needle 18G 1 ½ | Becton-Dickinson Biosciences | 305196 | |
| Ago di Precisione 27G ½ | Becton-Dickinson Biosciences | 305109 | |
| Siringa da insulina, 3/10 cc U-100, 29G½ | Becton-Dickinson Biosciences | 309301 | |
| Lama chirurgica No.10 | Feather Safety Razor Co. | 08-916-5A | |
| #5-0 Sutura chirurgica in seta morbida, ago a punta conica da 3/8" | Syneture | VS-880 | |
| Nastro chirurgico transporoso | 3M Health care | 1577-1 | |
| Applicatore in cotone | Medpro | 018-425 | |
| Chirurgicel, cellulosa rigenerata ossidata | Ethicon | 1951 | |
| Filtro cellulare 100 μ m nylon | Becton-Dickinson Biosciences | 352360 | |
| Illuminazione di ingrandimento con base mobile | Benson medical Industries Inc. | modello: RLM-CLT-120V | |
| Petridish sterile 100x20 mm | Sarstedt | 821474 | |
| Pinza per tessuti, 1x2 denti, 4-1/2" | Almedic | A10-302 | |
| Pinza per medicazione Adson 4-3/4" | Almedic | A10-220 | |
| Pinza per medicazione per occhi, seghettata, diritta, 4" | Almedic | A19-560 | |
| Pinza emostatica Hartman, curva, 3-1/2" | Almedic | A12-142 | |
| Forbice iride, curva, 4-1/4" | Almedic | A8-690 | |
| Forbice iride, diritta, 4-1/2" | Almedic | A8-684 | |
| Cacciavite ad ago Olsen-Hegan, 5-1/2" | Almedic | A17-228 |
Riferimenti
- El-Serag, H. B. Hepatocellular carcinoma. N. Engl. J. Med. 365, 1118-1127 (2011).
- Li, Y., Tang, Z. Y., Hou, J. X. Hepatocellular carcinoma: insight from animal models. Nat. Rev. Gastroenterol Hepatol. 9, 32-43 (2012).
- Tateishi, R., Omata, M.
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Ristampe e permessi
