Nel 2001, i ricercatori della UCLA hanno descritto l'isolamento di una popolazione di cellule staminali adulte, chiamate cellule o ASC staminali derivate da tessuto adiposo, dal tessuto adiposo. Questo articolo descrive l'isolamento di ASC da lipoaspirato utilizzando un protocollo digestione enzimatica manuale mediante collagenasi.
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Articolo metodologico
Isolamento Manuale di cellule staminali derivate da tessuto adiposo da lipoaspirato umani
In questo articolo
Sommario
Abstract
Nel 2001, i ricercatori della University of California, Los Angeles, ha descritto l'isolamento di una nuova popolazione di cellule staminali adulte dal tessuto adiposo liposuzione che inizialmente chiamati celle lipoaspirato trasformati o cellule PLA. Da allora, queste cellule staminali sono stati rinominati in cellule staminali derivate da tessuto adiposo o ASC e sono andati a diventare uno dei più popolari popolazioni di cellule staminali adulte nel campo della ricerca sulle cellule staminali e la medicina rigenerativa. Migliaia di articoli ora descrivono l'uso di ASC in una varietà di modelli animali di rigenerazione, compreso rigenerazione ossea, la riparazione dei nervi periferici e ingegneria cardiovascolare. Articoli recenti hanno cominciato a descrivere la miriade di usi per ASC nella clinica. Il protocollo illustrato in questo articolo è descritta la procedura di base per mano e enzimaticamente isolare ASC da grandi quantità di lipoaspirato ottenuti da procedure cosmetiche. Questo protocollo può essere facilmente scalato verso l'alto o verso il basso per alloggiomangiato il volume di lipoaspirato e può essere adattato per isolare ASC dal tessuto grasso ottenuti attraverso abdominoplasties e in altri procedimenti analoghi.
Introduzione
Nel 2001, una popolazione putativo di cellule staminali multipotenti dal tessuto adiposo è stato descritto nella Tissue Engineering 1 rivista. Queste cellule sono stati dati i nomi trasformati lipoaspirato o PLA cellule a causa della loro derivazione dal tessuto lipoaspirato trasformati ottenuti attraverso la chirurgia estetica. Il metodo di isolamento descritto in questo articolo è stato basato sulle strategie enzimatiche esistenti per l'isolamento della frazione stromale vascolare (SVF) dal tessuto adiposo 2. Il SVF è stata definita come una popolazione minimamente trasformati dei globuli rossi, fibroblasti, cellule endoteliali, cellule mu....
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Protocollo
Il protocollo qui illustrato descrive l'isolamento manuale di ASC da lipoaspirato ottenuti attraverso procedure cosmetiche usando digestione enzimatica e centrifugazione differenziale. Questo protocollo è stato pubblicato sulla rivista Tissue Engineering nel 2001 1, in cui le cellule risultanti sono stati chiamati celle lipoaspirato trasformati o cellule PLA a causa del loro isolamento da lipoaspirato. Tuttavia, la cella PLA termine è stata sostituita con le derivate da tessuto adiposo Cellule o ASC per dare al settore una sorta di conformità in termini di nomenclatura staminali termine. Le cellule isolate tramite ques....
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Risultati
Lo schema di protocollo di cui sopra descrive un metodo enzimatico manuale per l'isolamento di un SVF da un ampio campione lipoaspirato volume. All'interno di questo SVF sono numerose popolazioni cellulari, tra cui il ASC. Numerosi studi suggeriscono che la coltura di questo SVF in condizioni di coltura di tessuti normali selezionerà per una popolazione fibroblasti aderenti rischia di essere composta principalmente di tipo ASC. Coerentemente con questo, abbiamo dimostrato, mediante citometria a flusso ed immunof.......
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Discussione
Il tessuto adiposo per l'isolamento di ASC può venire in molte forme: da pezzi solidi di tessuto ottenuti con la resezione o liposuzione in piccoli pezzi ottenuti attraverso sia l'estrazione siringa o liposuzione aspirazione assistita (cioè liposuzione). Se le cellule più SVF (e quindi ASC) possono essere ottenuti da campioni adiposi resecati o aspirati non è chiaro come gli studi contrastanti sono stati presentati 16, 17. E 'possibile che sia sotto forma di tessuto adiposo è più adatto p.......
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Dichiarazioni
Gli autori di questo manoscritto sono co-inventori su un brevetto di proprietà di The Regents dell'Università della California e in licenza a Cytori Therapeutics.
Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare e ringraziare quei personale di ricerca aggiuntivi che hanno contribuito allo sviluppo del protocollo descritto e il suo isolamento di ASC, tra cui: Dr. H. Peter Lorenz, MD, il dottor Hiroshi Muzuno, MD, Dr. Jerry Huang, MD , Dr. Adam Katz, MD, Dr. William Futrell, MD, Dr. Rong Zhang, DDS, PhD, Dr. Larissa Rodriguez, MD, Dr. Alfonso Zeni, PhD, e il dottor John Fraser, PhD. I risultati presentati sono stati finanziati, in parte, da borse di ricerca dal National Institutes of Health, compresi i NIAMS e NIDCR Istituti.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Reagent | |||
| DMEM (Dulbecco’ s Modifica di Eagle’ Mediatech | Cellgro | 10-013-CV | con 4,5 g/ml di glucosio, L-glutammina, piruvato di sodio |
| Penicillina/Streptomicina | Mediatech Cellgro | 30-002-CI | 10.000 UI/ml penicillina/10.000 μ g/ml streptomicina |
| Amfotericina B | Mediatech Cellgro | 30-003-CF | 250 μ g/ml amfotericina B |
| 10X PBS (soluzione salina fosfo-tamponata) | Mediatech Cellgro | 25-053-CI | senza calcio, senza magnesio |
| Tripsina/EDTA | Mediatech Cellgro | 20-031-CV | 0,25 % tripsina/2,21mM EDTA |
| Collagenasi tipo IA (da Clostridium histolyticum) | Preparato grezzo Sigma | C2674 | ; < 125 unità di digestione del collagene/mg solido |
| FBS (Fetal Bovine Serum) inattivato a caldo | Gemini Bioproducts | 100106 | fonte USDA, inattivato a calore |
| Pipette sierologiche da 10 ml | Genesee Scientific | 12-104 | |
| Pipette sierologiche da 25 ml | Genesee Scientific | 12-106 | |
| Provette da centrifuga in polipropilene da 50 ml | Genesee Scientific | 21-106 | |
| piastre per coltura tissutale da 100 mm | Genesee Scientific | 25-202 | |
| piastre per coltura tissutale da 150 mm | Genesee Scientific | 25-203 | |
| Unità filtranti Stericup da 500 ml | Membrana Millipore | SCGPU05RE | PES, 0,22 μ Filtri cellulari a poro |
| m FisherBrand | 22-363-549 | 100 μ m rete di nylon | |
| desametasone - solubile in acqua | Sigma | D-2915 | |
| acido L-ascorbico 2 fosfato | Sigma | A-8960 | |
| β-glicerofosfato sale disodico | Sigma | G-9422 | noto anche come glicerofosfato |
| insulina | Sigma | I-6634 | a base di indometacina pancreas bovina |
| Sigma | I-7378 | ||
| apo-transferrina | Sigma | T-4382 | |
| TGFβ 1 | R& D Systems | 240-B-002 | umano ricombinante |
| Rosso O | Sigma | O-0625 | |
| Blu Alciano | Sigma | A-5268 | |
| Nitrato d'argento | Sigma | S-0319 | |
| Acido cloridrico | Fisher Scientific | A144 | |
| Paraformaldeide | Fisher Scientific | 30525-89-4 | fornito come stock |
| [intestazione] | |||
| Attrezzatura necessaria | |||
| Classe II A/B Cappa di biosicurezza | Thermo Scientific | assicura che la cappa sia dotata di linee di vuoto per l'aspirazione | |
| Centrifuga da banco | Hermle Labnet | Z383 | Rotore oscillante per provette da 50 ml richiesto, capace di 1200xg |
| d'acqua | Fisher Scientific Isotemp | S52602Q | capacità di 5-10 litri, capace di 37C |
| Pipette Aid Automatizzate | Drummond Pipette Aid XL | 4-000-105 | |
| CO2 Incubatore | Thermo Scientific | Forma 310 | calore diretto o con rivestimento ad acqua |
Riferimenti
- Zuk, P. A., et al. Multi-lineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Engineering. 7 (2), 211-226 (2001).
- Rodbell, M. Metabolism of isolated fat cells. J. Biol. Chem. 239, 375-380 (1964).
- Poznanski, W. ....
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Ristampe e permessi
