Microiniezione stereotassica di vettori virali che esprimono Cre ricombinasi per studiare il ruolo di geni bersaglio in cocaina condizionata place preference

Sommario

Questo articolo viene descritto come microinject vettori virali nel cervello di topo e poi prova in un luogo climatizzato preferenza paradigma che comprende una fase di acquisizione, l'estinzione e la reintegrazione.

Abstract

Microinjecting virali (rAAV) vettori ricombinanti adenoassociated esprimono Cre ricombinasi in distinte regioni del cervello del mouse in modo selettivo i geni knockout di interesse permette maggiore controllo temporalmente e specifici per ogni regione di delezione genica, rispetto ai metodi esistenti. Mentre delezione condizionale può essere ottenuto anche con accoppiamento topi che esprimono ricombinasi Cre sotto il controllo di promotori genici specifici con i topi che portano un gene floxed, microiniezione stereotassico consente per il targeting delle aree cerebrali discrete a sperimentatore-determinati punti di tempo di interesse. Nel contesto di cocaina luogo preferenza condizionata, e altri paradigmi comportamentali della cocaina come l'auto-somministrazione o psicomotorio sensibilizzazione che può coinvolgere recesso, estinzione e / o fasi di rimessa, questa tecnica è particolarmente utile a esplorare il contributo unico di geni bersaglio di questi distinti fasi di modelli comportamentali di cocaina indotta plasticità. Specificamente,Questa tecnica permette di ablazione selettiva di geni bersaglio durante fasi distinte di un comportamento di testare il loro contributo al comportamento nel tempo. In definitiva, questa comprensione permette terapeutica più mirati che sono meglio in grado di affrontare i fattori di rischio più potenti che si presentano nel corso di ogni fase del comportamento di dipendenza.

Introduzione

La cocaina è uno psicostimolante altamente rinforzo. A seguito di esposizione ripetuta, diversi adattamenti molecolari e cellulari che si verificano in ricompensa rilevanti circuiti cerebrali che si ritiene di provocare compulsivo di droga in cerca di comportamento, provocando alti tassi di recidiva che presentano un grave problema clinico ^1. La cocaina esercita questi effetti comportamentali di lunga durata di regolare l'espressione genica. Per studiare gli adattamenti derivanti da uso cronico di cocaina, roditori modelli preclinici sono stati ampiamente utilizzati. Uno di questi modelli è il luogo preferenza paradigma condizionata (CPP). Tale modello....

Protocollo

Tutte le procedure sono condotte in conformità con il Weill Cornell Medical College Institutional Animal Care e Usa regole del Comitato.

1. Preparazione e configurazione di consegna stereotassico di vettori virali

1. Se uno strumento, tampone sterile, o della mano indossando guanti sterili è contaminata da entrare in contatto con una superficie non sterile, eliminare o ri-sterilizzare lo strumento con un caldo tallone sterilizzatore, scartare il tampone o passare a nuovi guanti sterili.
2. Posizionare una gabbia del mouse con biancheria da letto su un blocco di calore per riscaldare per il recupero post-operatorio.

Risultati

CPP

Dopo aver eseguito CPP sui topi microiniettati, si dovrebbe verificare che il gruppo di controllo a iniezione (rAAV-GFP) topi hanno normalmente acquisito preferenza per la camera di farmaco-accoppiato (Figura 1A, 1B). I topi sono considerati di aver acquisito la preferenza per una particolare camera di preferenza quando la cocaina (tempo trascorso nella camera di cocaina-accoppiato meno tempo trascorso in camera salina-accoppiato) è significativamente più alto rispetto al b.......

Discussione

Regionalmente e temporalmente specifici ablazione genica tramite microiniezione stereotassico di vettori virali combinati con CPP che include estinzione e le fasi di rimessa permette di indagine dei contributi specifici di geni di tre distinte fasi di comportamenti di dipendenza simile. Mentre knockout condizionale che viene realizzato utilizzando il sistema Cre-loxP tradizionale prevede spazio-temporalmente limitato ablazione genica, stereotaxically microinjecting Cre-ricombinasi in aree distinte del cervello di topi f.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Camere di attività di preferenza di luogo condizionate	Med Associates, Inc., St. Albans, VT, USA	MED-CPP-MS
Sistema di allineamento stereotassico per topo	David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA	modello 900
Siringhe Hamilton	Hamilton Company, Reno, Nevada, USA	7634-01
rAAV2-Cre-GFP	Vector BioLabs, Philadelphia, PA, USA	7016
rAAV2-GFP	Vector BioLabs, Filadelfia, PA, Stati Uniti	7004