Il crescente utilizzo di zebrafish come modello animale richiede lo sviluppo di metodi efficaci per la consegna di quantità note di composti e soluzioni. La procedura descritta di seguito gavage consente la somministrazione orale di volumi precisi di soluzione affidabile, sicuro ed efficiente per zebrafish adulto.
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Articolo metodologico
Gavaging Zebrafish adulti
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il pesce zebra è diventato un importante modello in vivo nella ricerca biomedica. Devono essere sviluppate e utilizzate per fornire i composti o agenti in soluzioni per la ricerca scientifica metodi efficaci. I metodi attuali per la somministrazione di composti per via orale per zebrafish adulti sono inesatte a causa della variabilità dei consumi volontaria da parte del pesce. Una procedura sonda gastrica è stato sviluppato per fornire quantitativi precisi di agenti infettivi per zebrafish per lo studio nella ricerca biomedica. Zebrafish adulto oltre 6 mesi di età sono stati anestetizzati con 150 mg / L di tampone MS-222 e gavaged con 5 ml di soluzione con flessibile catetere impianto tubo collegato a un taglio di 22-G punta dell'ago. Il tubo flessibile è stato abbassato nella cavità orale del zebrafish finché la punta del tubo prolungato oltre le branchie (circa 1 cm). La soluzione è stata poi iniettato lentamente nel tratto intestinale. Questo metodo è stato efficace 88% del tempo, con il pesce recuperando senza complicazioni. Questoprocedura è anche efficace come una persona può sonda gastrica 20-30 pesci in un'ora. Questo metodo può essere utilizzato per gestire con precisione gli agenti di malattie infettive studi, o studi di altri composti in zebrafish adulto.
Introduzione
I metodi attuali per la somministrazione di composti per via orale per zebrafish includono composti somministrazione superiore rivestite su alimentazione, mescolati in diete gelatina 1, bioencapsulated in salamoia gamberetti 2, mescolati con lipidi diete incapsulati 3, cera perline spruzzo 4 e attraverso le diete a base di glutine. 5 Limitazioni di questi metodi di somministrazione orale includono alti tassi di lisciviazione e il consumo di composti incompleta o imprevedibile per singolo esemplare. Queste variabili sono problematici perché in studi di malattie infettive, sapendo la dose infettiva somministrata pe....
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Protocollo
1. Preparazione della soluzione anestetica
- Preparare una soluzione di 150 mg / L di MS-222 in acqua sistema sia da una soluzione madre o dalla forma in polvere.
- Verifica del pH con un pHmetro.
- Tampone con bicarbonato di sodio come necessario fino a quando il pH è compreso tra 7-7.5.
- Preparare un serbatoio di acqua sistema libero da MS-222 per il pesce di recuperare in Il tempo di recupero è in genere meno di 1 min.
2. Preparazione del Apparato Gavage
- Tagliare la chiara 22-G impiantazione tubo per poco più di lunghezza approssimativa dalla bocca al bulbo intestinale del pesce. Inizi....
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Risultati
Entrambi i sessi di pesci, tra cui femmine gravide sono state gavaged con successo (Figura 1). Una procedura di successo richiede meno di un minuto senza liquido visto uscire le branchie o la bocca. Il tubo entra facilmente, senza forza, senza sangue visto al momento della rimozione del catetere. La procedura è rapida, che richiede circa 10 minuti per gavage 3 a 4 pesce, con una media di 30-45 sec per pesci.
Zebrafish non deve essere gavaged con più di 5 pl di qualsiasi solu.......
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Discussione
Significato
Questa tecnica è un miglioramento e fornisce diversi vantaggi rispetto le due tecniche descritte in precedenza per gavaging zebrafish adulto. Prima, l'uso di una spugna per trattenere il pesce permette una persona per effettuare la procedura, al contrario di una tecnica precedentemente descritta richiede due persone. 7 Secondo, tubi impianto del catetere è più flessibile di cateteri, che può aiutare a minimizzare il trauma secondario dovuto di perforazione in modo sim.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.
Ringraziamenti
La Rockefeller University Comparative Centro Bioscience fornito il supporto per questo progetto. Ringraziamo Janelle Monnas per l'assistenza tecnica.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Equipment | |||
| A spugna | |||
| 1-cc luer lock siringa | Becton Dickinson Co | ||
| 22-G Micro-Renathane Implantation tubing (cut) | Braintree Scientific, Inc. | ||
| 1 ago da 22 G (tagliare, se necessario) | Becton Dickinson Co | ||
| pHmetro | Sonda | ||
| 1 lama | |||
| [header] | |||
| Reagent/Material | |||
| MS-222 (Finquel) | Argent Laboratories | ||
Riferimenti
- Royes, J. -A. B., Chapman, F. Preparing Your Own Fish Feeds. , Department of Fisheries and Aquatic Sciences, Florida Cooperative Extension Service, Insitute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida. (2009).
- Gomez-Gil, B., Cabanillas-Ramos, J., Paez-Brambila, A., Roque, A. Standardization of th....
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Ristampe e permessi
