In questo articolo video, descriviamo un test automatico per misurare l'effetto della fame o sazietà su olfattiva dipende comportamento di ricerca di cibo nel frutto adulto Drosophila melanogaster.
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Articolo metodologico
A Single-fly saggio per comportamento alimentare in Drosophila
In questo articolo
Sommario
Abstract
Per molti animali, la fame promuove cambiamenti nel sistema olfattivo in un modo che facilita la ricerca di fonti di cibo adeguate. In questo articolo video, descriviamo un test automatico per misurare l'effetto della fame o sazietà su olfattiva dipende comportamento di ricerca di cibo nel frutto adulto Drosophila melanogaster. In una scatola a tenuta di luce illuminato da luce rossa che è invisibile ai moscerini della frutta, una telecamera legata al software di acquisizione dati personalizzato controlla la posizione di sei mosche contemporaneamente. Ogni mosca si limita a camminare nelle singole arene contenenti un odore di cibo al centro. Le arene di test poggiano su un pavimento poroso che funziona per prevenire l'accumulo di cattivi odori. Latenza per localizzare la sorgente odore, un parametro che riflette la sensibilità olfattiva sotto diversi stati fisiologici, è determinata mediante analisi software. Qui, discutiamo i meccanismi critici di funzionamento di questo paradigma comportamentale e copriamo questioni specifiche riguardanti fly loading, contaminazione odore, la temperatura del test, qualità dei dati e l'analisi statistica.
Introduzione
Stati di fame promuovere due tipi di comportamenti appetitivi: ricerca di cibo e di consumo alimentare 1. Questo semplice test comportamentale è utile per lo studio dei comportamenti chemiotattici associati foraggiamento 2,3. In particolare, si rintraccia la posizione fly, velocità di piedi e la latenza per l'individuazione di un obiettivo odore di cibo. Latenza di trovare cibo serve come parametro per i cambiamenti nella sensibilità del sistema di rilevamento dell'odore della mosca valle delle variazioni del suo stato appetitivo interna di misura. Una versione manuale di questo test è stato precedentemente utilizzato per mostrare segnal....
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Protocollo
1. Fly Raccolta e fame
- Posteriore linea sperimentali in condizioni di temperatura e umidità controllate (ad esempio 21 ° C, 50-60% di umidità relativa) su una luce di 12 ore / ciclo scuro.
- Raccogliere femminile vola il giorno della eclosion e luogo loro, insieme con 4-5 maschi, in nuove fiale alimentari (massimo 30 per fiala). Età vola 2-5 giorni.
- Preparare le camere per volare fame.
- Spingere un singolo tessuto (4,8 x 8,4 pollici) fino al fondo di una fiala di plastica vuoto. Completamente bagnare il tessuto con acqua distillata. Utilizzare un oggetto da spingere verso il basso sul tessuto e delicatamente spremere l....
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Risultati
Il software di analisi dei dati e il layout, di cui un esempio può essere visto in Figura 1, sono utilizzate per valutare le prestazioni di ciascun volo durante la sua prova di 10 min secondo un insieme di criteri di analisi. I seguenti criteri sono utilizzati per determinare se i dati di ogni volo saranno utilizzati per l'analisi dei dati e sono progettati per eliminare le mosche che sono in grado di eseguire l'operazione di ricerca alimentare a causa di infortunio, malattia, stress, o la mancanza di m.......
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Discussione
In questo protocollo, si descrive una procedura step-by-step per il saggio comportamento di ricerca di cibo. Oltre agli odori legati all'alimentazione, può anche essere adattato per lo studio della capacità della mosca per individuare altri oggetti odore. Ad esempio, può essere applicato verso lo studio del comportamento localizzazione compagno in mosche maschio 3 Ci sono diverse considerazioni aggiuntive per questo protocollo che citeremo qui quest'azienda procedura.:
In .......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano assenza concorrente interesse finanziario.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto da borse di ricerca a JWW dal National Institute of Health (R01DK092640) e la National Science Foundation (0.920.668).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Aceto di sidro di mele | Spectrum | disponibile in commercio | |
| Agarosio, Tipo VII | Sigma-Aldrich | A0701 | |
| di prova acrilica | personalizzata | contiene 6 arene. Ogni arena ha un diametro di 60 mm e un'altezza di 6 mm. Vedere i diagrammi delle piastre di prova per misurazioni specifiche. | |
| Piattaforma LabVIEW V.8.5 | National Instruments | 776670-09 | per programmi: PositioningTool.vi, FlyTracking--Six Zones.vi NOTA: "elapsed time.vi", "time into file.vi" e "two object detect.vi" sono subroutine incluse che devono essere disponibili per l'esecuzione del programma di acquisizione dati principale "FlyTracking--Six zones.vi". |
| LabVIEW Vision 8.5 | |||
| LabVIEW Vision Acquisition Software 8.5 | |||
| LabVIEW Vision Builder AI 3.5 | |||
| Igor Pro V.6 | Wavemetric, Inc. | piattaforma per macro: analisi dei dati per il Fly Tracking - Sei zone | |
| Basler scA1390-17fm | National Instruments | 779980-01 | Fotocamera digitale NOTA: driver per fotocamera disponibile su Baslerweb.com |
| obiettivo da 8 mm | National Instruments | 780024-01 | Obiettivo per fotocamera digitale Basler |
| Piastra diffusore in vetro smerigliato | Edmund Optics | personalizzato | Diffonde la luce, 25 cm x 30 cm |
| US Std. No. 100 | Fischer Scientific | 04-881X | Setaccio con apertura nominale di 150 μ m |
| Opzione di illuminazione: 1 | |||
| LED retroilluminazione: 660 nm (20 cm x 20 cm) | Spectra West | BL47192 | un'opzione di illuminazione più semplice ma più costosa. |
| Alimentatore per retroilluminazione a LED | Spectra West | ||
| Opzione di illuminazione 2 | |||
| >660 nm LED | Superbrightleds | RL5R1330 | lunghezza d'onda 660 nm (circa 7 x 7 array di LED per un pannello da 14,7 pollici x 9,75 pollici) |
| Alimentatore CC lineare | GW Instek | GPS-1830D | Alimentatore per pannello LED |
| Breadboard senza saldatura | Digikey | 922354-ND | Breadboard per LED |
Riferimenti
- Dethier, V. G. The hungry fly : a physiological study of the behavior associated with feeding. , Harvard University Press. (1976).
- Root, C. M., Ko, K. I., Jafari, A., Wang, J. W. Presynaptic facilitation by neuropeptide signaling mediates odor-driven food search. Cell.
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Ristampe e permessi
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